| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 縮略语表 | 第8-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-19页 |
| ·果蝇的生物学特性及转基因介绍 | 第9-10页 |
| ·睡眠研究现状 | 第10页 |
| ·睡眠的分子机理 | 第10页 |
| ·生物节律研究现状 | 第10-14页 |
| ·果蝇的光信号输入系统 | 第11-12页 |
| ·果蝇节律生物钟分子机制 | 第12-13页 |
| ·外周生物钟 | 第13-14页 |
| ·果蝇核心钟蛋白PERIOD和TIMELESS研究现状 | 第14-15页 |
| ·果蝇核心钟蛋白PERIOD研究现状 | 第14-15页 |
| ·果蝇核心钟蛋白TIMELESS研究现状 | 第15页 |
| ·果蝇钟蛋白PERIOD和TIMELESS相互作用研究现状 | 第15页 |
| ·蛋白质表达体系 | 第15-18页 |
| ·原核表达系统 | 第15-16页 |
| ·昆虫杆状病毒表达系统 | 第16-18页 |
| ·本研究的内容和意义 | 第18-19页 |
| 第二章 夜间光照对黑腹果蝇睡眠和生存能力影响 | 第19-33页 |
| ·材料与方法 | 第19-23页 |
| ·果蝇品系及饲养 | 第19页 |
| ·主要仪器设备及试剂 | 第19-20页 |
| ·果蝇的睡眠监测 | 第20-21页 |
| ·果蝇脑蛋白提取及蛋白质免疫印迹 | 第21-22页 |
| ·实时荧光PCR(qPCR) | 第22页 |
| ·果蝇排卵量的测定 | 第22-23页 |
| ·果蝇寿命的监测 | 第23页 |
| ·果蝇后代生活史的监测 | 第23页 |
| ·数据统计 | 第23页 |
| ·结果分析 | 第23-31页 |
| ·夜间光照对野生型果蝇睡眠的影响 | 第23-25页 |
| ·夜间光照对果蝇钟基因cry和光敏蛋白CRY的影响 | 第25-26页 |
| ·夜间光照对果蝇钟基因tim和蛋白TIM的影响 | 第26-28页 |
| ·cry和tim突变体的睡眠监测 | 第28-29页 |
| ·cry和tim下调果蝇的睡眠监测 | 第29-30页 |
| ·夜间光照对果蝇生殖力的影响 | 第30页 |
| ·夜间光照对果蝇寿命的影响 | 第30-31页 |
| ·夜间光照对后代生活史的影响 | 第31页 |
| ·讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 果蝇核心钟基因蛋白TIMELESS和PERIOD相互作用机制 | 第33-61页 |
| ·材料与方法 | 第33-44页 |
| ·主要果蝇品系 | 第33页 |
| ·主要试剂和质粒 | 第33-34页 |
| ·果蝇基因组DNA提取 | 第34页 |
| ·瞬时表达质粒构建和无内毒素质粒提取 | 第34-36页 |
| ·S2细胞培养及瞬时转染 | 第36-38页 |
| ·转基因果蝇质粒构建和转基因果蝇品系构建 | 第38-39页 |
| ·果蝇的杂交和昼夜活动节律监测 | 第39-40页 |
| ·果蝇脑免疫组化及成像 | 第40页 |
| ·大肠杆菌原核表达(E.coli表达系统)和纯化 | 第40-42页 |
| ·昆虫细胞真核表达(Bac-to-ba杆状病毒昆虫表达系统) | 第42-44页 |
| ·FLAG-标签pull-down实验 | 第44页 |
| ·结果分析 | 第44-59页 |
| ·细胞水平TIM稳定PER功能域确定 | 第44-45页 |
| ·果蝇活体内TIM稳定PER行为学验证 | 第45-49页 |
| ·果蝇活体内TIM稳定PER果蝇脑免疫组化验证 | 第49-51页 |
| ·基因克隆、原核蛋白表达和纯化 | 第51-55页 |
| ·目的蛋白克隆和真核表达 | 第55-57页 |
| ·蛋白质间相互作用实验(FLAG-pull dowm) | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 第四章 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附录 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 作者简历 | 第75页 |
