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柯萨奇病毒A组16型VP1蛋白原核表达、纯化及鉴定

摘要第1-6页
Abstract第6-10页
主要符号表第10-11页
第一章 绪论第11-20页
   ·手足口病概述第11页
   ·手足口病的主要病原体第11页
   ·CVA16 的基因形态第11-12页
   ·CVA16 的流行病学特征第12-14页
     ·CVA 16 分子流行病学第13-14页
     ·CVA 16 血清流行病学第14页
   ·CVA 16 实验室诊断和病毒学监测第14-16页
     ·病毒分离法第15页
     ·病毒抗体检测法第15-16页
   ·分子生物学的检测第16-17页
     ·实时荧光定量 PCR( Real-time PCR)第16-17页
     ·逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)第17页
     ·基因芯片技术( Microarray)第17页
   ·CA16 的药物治疗及其局限性第17页
     ·抗病毒药物的研究第17页
     ·免疫球蛋白的研究第17页
   ·CVA 16 的研究小结第17-18页
   ·CVA 16 的预防第18页
   ·项目意义第18-20页
第二章 材料与方法第20-53页
   ·材料第20-36页
     ·受体菌第20页
     ·主要试剂第20-21页
     ·实验主要用液的配制第21-35页
     ·主要仪器与设备第35-36页
   ·方法第36-53页
     ·CVA 16 VP1 抗原的克隆与鉴定第36-43页
     ·重组抗原蛋白(VP1)的表达、纯化及鉴定第43-50页
     ·捕获 ELISA 方法的建立第50-53页
第三章 结果与分析第53-60页
   ·VP1 基因片段的扩增和 pET-41a(+)/VP1 重组质粒的构建第53-54页
     ·PCR 扩增 VP1 目的基因片段第53页
     ·菌落 PCR 鉴定第53-54页
     ·重组质粒 pET-41a(+)/VP1 的双酶切鉴定第54页
     ·酶切产物的测序鉴定第54页
   ·重组蛋白 VP1 的原核表达、纯化及鉴定第54-58页
     ·重组蛋白 VP1 的诱导表达第54-55页
     ·重组蛋白 VP1 的表达条件的优化第55-56页
     ·重组蛋白 VP1 的的纯化第56-57页
     ·重组蛋白 VP1 蛋白的 Western Blot 鉴定第57页
     ·蛋白浓度的测定第57-58页
   ·捕获法的初步建立第58-60页
     ·阴阳血清筛选第58页
     ·棋盘法确定包被浓度和酶结合物工作浓度第58页
     ·交叉反应实验第58页
     ·精密性试验第58-60页
第四章 讨论第60-63页
   ·VP1 基因的选取第60页
   ·加入连接臂第60-61页
   ·诱导条件的优化第61页
   ·重组抗原纯化方法的选择第61-62页
   ·ELISA 捕获法检测方法的建立第62-63页
第五章 结论第63-64页
参考文献第64-70页
附录第70-71页
致谢第71-73页
个人信息第73-74页
 个人简历第73-74页
 攻读学位期间发表文章情况第74页

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