| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-12页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-20页 |
| ·牛支原体历史及危害 | 第12页 |
| ·牛支原体病原学 | 第12-13页 |
| ·牛支原体流行病学 | 第13-14页 |
| ·牛支原体诊断方法 | 第14-16页 |
| ·病原分离鉴定 | 第14页 |
| ·牛支原体基因检测 | 第14-15页 |
| ·牛支原体血清学检测方法 | 第15-16页 |
| ·牛支原体分型技术 | 第16页 |
| ·牛支原体可变表面膜蛋白 | 第16-18页 |
| ·牛支原体疫苗及药物治疗 | 第18-20页 |
| 第2章 引言 | 第20-22页 |
| ·研究的目的意义 | 第20页 |
| ·研究的主要内容 | 第20-22页 |
| 第3章 牛支原体外膜蛋白的提取、免疫活性分析及质谱鉴定 | 第22-32页 |
| ·材料 | 第22-25页 |
| ·菌株及牛支原体阳性血清 | 第22页 |
| ·主要仪器和设备 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第23页 |
| ·主要试剂的配制 | 第23页 |
| ·主要培养基 | 第23页 |
| ·主要试剂的配制 | 第23-25页 |
| ·方法 | 第25-27页 |
| ·牛支原体外膜蛋白粗提取 | 第25页 |
| ·SDS-PAGE分析 | 第25-26页 |
| ·WESTERN BLOT鉴定 | 第26-27页 |
| ·质谱分析 | 第27页 |
| ·结果 | 第27-30页 |
| ·外膜蛋白SDS-PAGE结果 | 第27-28页 |
| ·外膜蛋白WESTERN BLOT结果 | 第28页 |
| ·LTQ质谱分析结果 | 第28-30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 第4章 牛支原体VSP重复片段的的原核表达及活性鉴定 | 第32-44页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·载体与菌种 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·主要试剂的配制 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-36页 |
| ·牛支原体VSP重复片段的筛选及生物信息学分析 | 第34页 |
| ·牛支原体VSPA重复片段基因的合成及原核表达 | 第34-36页 |
| ·WESTERN BLOT | 第36页 |
| ·结果 | 第36-41页 |
| ·牛支原体VSPA重复片段的筛选及生物信息学分析 | 第36-40页 |
| ·牛支原体VSP重复片段的原核表达 | 第40页 |
| ·纯化蛋白的SDS-PAGE分析及浓度测定 | 第40-41页 |
| ·WESTERN BLOT分析 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-44页 |
| 第5章 牛支原体间接ELISA抗体检测方法的建立及条件优化 | 第44-58页 |
| ·材料 | 第44-45页 |
| ·菌株 | 第44页 |
| ·主要仪器和设备 | 第44-45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·间接ELISA所需试剂的配制 | 第45页 |
| ·临床血清样本 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-48页 |
| ·无乳支原体免疫血清的制备 | 第46页 |
| ·牛支原体间接ELISA检测方法的研究 | 第46-48页 |
| ·结果 | 第48-55页 |
| ·多抗血清效价检测 | 第48-49页 |
| ·抗原蛋白最佳包被浓度和血清稀释倍数的确定 | 第49-50页 |
| ·封闭条件的选择 | 第50-51页 |
| ·抗原最佳包被条件的确定 | 第51页 |
| ·血清最适反应温度及时间的选择 | 第51-52页 |
| ·酶标抗体最适反应条件的确定 | 第52-53页 |
| ·底物反应时间的选择 | 第53页 |
| ·阴阳临界值的确定 | 第53页 |
| ·特异性试验 | 第53页 |
| ·重复性试验 | 第53-54页 |
| ·与3种ELISA商业试剂盒对比 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| 第6章 结论 | 第58-60页 |
| ·牛支原体VSP的提取及免疫活性分析 | 第58页 |
| ·牛支原体VSP重复片段的原核表达及免疫活性的分析 | 第58页 |
| ·牛支原体间接ELISA抗体检测方法的建立 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 附表 | 第64-66页 |
| 致谢 | 第66-68页 |
| 攻读硕士期间发表文章 | 第68页 |
