| 致谢 | 第1-8页 |
| 缩略词表 | 第8-9页 |
| 摘要 | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-26页 |
| ·烟碱研究现状 | 第11-15页 |
| ·烟株体内烟碱合成的生物学意义 | 第11页 |
| ·不同生产调控因子对烤烟内烟碱合成的影响 | 第11-13页 |
| ·遗传学因素对烟碱含量的影响 | 第13页 |
| ·伤害对烟碱合成的影响 | 第13页 |
| ·茉莉酸和生长素对烟碱合成的影响 | 第13-14页 |
| ·烟株中烟碱的合成部位 | 第14-15页 |
| ·烟碱生物合成分子机制的研究进展 | 第15-22页 |
| ·烟碱合成途径中的关键酶 | 第15-18页 |
| ·影响烟碱生物合成的调节因子 | 第18-20页 |
| ·研究烟碱生物合成分子机制的策略 | 第20-22页 |
| ·抑制差减杂交技术及其应用 | 第22-23页 |
| ·抑制差减杂交（SSH）技术 | 第22页 |
| ·抑制差减杂交技术（SSH）在植物中的应用 | 第22-23页 |
| ·发掘和克隆基因的方法 | 第23-25页 |
| ·电子克隆 | 第23-24页 |
| ·功能克隆 | 第24页 |
| ·转座子标记法 | 第24页 |
| ·cDNA 末端快速扩增（RACE） | 第24页 |
| ·图位克隆 | 第24-25页 |
| ·本研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 第二章 烟草打顶对腐胺 N-甲基转移酶基因表达的影响 | 第26-30页 |
| ·材料与方法 | 第26-27页 |
| ·材料培养 | 第26页 |
| ·RNA 提取 | 第26页 |
| ·cDNA 第一链合成 | 第26页 |
| ·半定量 RT-PCR | 第26-27页 |
| ·Northern 杂交 | 第27页 |
| ·烟碱含量测定 | 第27页 |
| ·结果与分析 | 第27-29页 |
| ·RNA 电泳检测 | 第27页 |
| ·PMT 引物和内参引物分管PCR 分析 | 第27-28页 |
| ·PMT 表达的 Northern 杂交分析 | 第28页 |
| ·上部烟叶烟碱含量变化 | 第28-29页 |
| ·结论 | 第29-30页 |
| 第三章 烟草打顶前后SSH cDNA文库的构建与分析 | 第30-55页 |
| ·材料与方法 | 第30-35页 |
| ·试验材料与试剂 | 第30页 |
| ·总RNA 的提取及 Poly(A)RNA 的分离 | 第30页 |
| ·抑制差减杂交 | 第30-31页 |
| ·消减cDNA 文库的构建（T/A 克隆法） | 第31页 |
| ·反向Northern杂交筛选差减cDNA文库 | 第31-32页 |
| ·差异表达 EST 的序列分析 | 第32页 |
| ·差异表达 EST 的半定量 RT-PCR | 第32-34页 |
| ·差异表达序列的 Northern 杂交分析 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-50页 |
| ·总RNA质量的检测 | 第35页 |
| ·双链cDNA 检测以及酶切 | 第35-36页 |
| ·连接效率检测 | 第36-37页 |
| ·SSH-cDNA 文库的构建 | 第37-38页 |
| ·菌落 PCR 验证 | 第38-39页 |
| ·反向 Northern 杂交探针效率检测 | 第39页 |
| ·反向 Northern 筛选 SSH-cDNA 文库 | 第39-40页 |
| ·ESTs 序列比对和预测结果 | 第40-48页 |
| ·6 个 EST 的RT-PCR 分析 | 第48-49页 |
| ·2 个 ESTs 的 Northern 杂交分析 | 第49-50页 |
| ·讨论 | 第50-53页 |
| ·结论 | 第53-55页 |
| 第四章 烟草中 NAC 类转录因子基因的克隆及分析 | 第55-80页 |
| ·材料与方法 | 第55-64页 |
| ·植物材料 | 第55页 |
| ·载体和主要试剂 | 第55页 |
| ·烟草NtNAC-R1的克隆 | 第55-57页 |
| ·pMDTM19-T-NAC构建 | 第57-58页 |
| ·烟草NtNAC-R1的序列分析 | 第58页 |
| ·NtNAC-R1在大肠杆菌中的诱导表达 | 第58-59页 |
| ·RT-PCR分析烟草NtNAC-R1的组织特异性表达情况 | 第59页 |
| ·RT-PCR分析烟株打顶后24 h内根尖组织NtNAC-R1的表达情况 | 第59页 |
| ·Northern杂交分析烟株打顶后24 h内根尖组织NtNAC-R1的表达情况 | 第59-61页 |
| ·反义NtNAC-R1表达载体pROK2-NtNAC-R1-的构建 | 第61页 |
| ·pROK2-NtNAC-R1-的农杆菌转化及PCR鉴定 | 第61-62页 |
| ·土壤农杆菌介导法转化烟草 | 第62-63页 |
| ·PCR检测转基因烟草中外源基因的整合 | 第63-64页 |
| ·R T-PCR检测转基因烟株中烟碱合成酶关键基因的表达变化 | 第64页 |
| ·结果 | 第64-77页 |
| ·烟草NAC的电子克隆与RT-PCR验证 | 第64-65页 |
| ·烟草NAC的序列分析 | 第65-69页 |
| ·NtNAC-R1的原核表达 | 第69-71页 |
| ·NtNAC-R1的组织特异性表达分析 | 第71-72页 |
| ·NtNAC-R1 在烟株打顶后24h 内的表达谱分析 | 第72-74页 |
| ·反义表达载体pROK2-NtNAC-R1-构建结果 | 第74页 |
| ·农杆菌阳性转化株 PCR 检测 | 第74-75页 |
| ·转基因烟草的获得 | 第75页 |
| ·转基因烟草植株的PCR检测 | 第75-76页 |
| ·RT-PCR 检测结果 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-79页 |
| ·结论 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-94页 |
| ABSTRACT | 第94-97页 |
| 攻读博士学位相关的文章 | 第97页 |
