凋亡抑制基因CED-9转化烟草和水稻的研究
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述——高等植物的PCD研究进展 | 第10-24页 |
| 1． 高等植物细胞死亡及PCD的形态特征 | 第10-11页 |
| 2． 高等植物生长发育中的PCD | 第11-14页 |
| 2．1 营养器官生长发育中的PCD | 第11-13页 |
| 2．1．1 根和茎 | 第11-12页 |
| 2．1．2 叶 | 第12-13页 |
| 2．2 生殖器官生长发育中的PCD | 第13-14页 |
| 2．2．1 花 | 第13页 |
| 2．2．2 种子和果实 | 第13-14页 |
| 3． 高等植物与环境相互作用中的PCD | 第14-17页 |
| 3．1 环境胁迫因子的类型 | 第14-17页 |
| 3．1．1 病原体 | 第14-16页 |
| 3．1．2 低O_2 | 第16页 |
| 3．1．3 高盐 | 第16-17页 |
| 3．2 环境胁迫诱导PCD的特点 | 第17页 |
| 4． 植物PCD信号传导途径 | 第17-22页 |
| 4．1 环境胁迫诱导PCD的重要信号分子 | 第17-19页 |
| 4．2 植物PCD调控基因 | 第19-20页 |
| 4．3 植物PCD的可能信号传导途径 | 第20-22页 |
| 5． 植物PCD的进化及其生物学意义 | 第22页 |
| 5．1 进化 | 第22页 |
| 5．2 生物学意义 | 第22页 |
| 6． 在作物抗逆基因工程中的应用 | 第22-23页 |
| 7． 植物PCD研究的几点思考 | 第23-24页 |
| 第二章 CED—9基因表达载体的构建 | 第24-36页 |
| 1． 材料和方法 | 第24-29页 |
| 1．1 实验材料 | 第24页 |
| 1．1．1 质粒与菌株 | 第24页 |
| 1．1．2 酶及主要试剂 | 第24页 |
| 1．2 实验方法 | 第24-29页 |
| 1．2．1 质粒DNA的小量快速抽提 | 第24-25页 |
| 1．2．2 质粒DNA的大量制备 | 第25-26页 |
| 1．2．3 质粒DNA的纯化（聚乙二醇沉淀法） | 第26页 |
| 1．2．4 菌种保存 | 第26页 |
| 1．2．5 DNA定量 | 第26-27页 |
| 1．2．6 DNA酶切 | 第27页 |
| 1．2．7 载体脱磷 | 第27页 |
| 1．2．8 琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| 1．2．9 DNA片段回收 | 第27-28页 |
| 1．2．10 DNA连接 | 第28页 |
| 1．2．11 大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第28页 |
| 1．2．12 DNA转化大肠杆菌 | 第28-29页 |
| 2． 结果和分析 | 第29-34页 |
| 2．1 pGEM—ced9质粒的构建 | 第29-30页 |
| 2．2 pBI—ced9表达载体的构建 | 第30-32页 |
| 2．3 pCA—ced9表达载体的构建 | 第32-34页 |
| 3． 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 CED-9基因农杆菌介导的烟草转化 | 第36-45页 |
| 1． 材料和方法 | 第36-40页 |
| 1．1 实验材料 | 第36页 |
| 1．2 实验方法 | 第36-40页 |
| 1．2．1 农杆菌的培养 | 第36页 |
| 1．2．2 DNA直接导入农杆菌 | 第36-37页 |
| 1．2．3 农杆菌介导的转化 | 第37页 |
| 1．2．4 CTAB法大量提取基因组DNA | 第37-38页 |
| 1．2．5 PCR检测转基因植株 | 第38页 |
| 1．2．6 Southern杂交 | 第38-40页 |
| 2． 结果和分析 | 第40-43页 |
| 2．1 筛选压的确定 | 第40-41页 |
| 2．2 转化植株的再生 | 第41页 |
| 2．3 转化植株的PCR法鉴定 | 第41-42页 |
| 2．4 转基因烟草的点杂交分析 | 第42页 |
| 2．5 转基因烟草的栽培与观察 | 第42-43页 |
| 3． 讨论 | 第43-45页 |
| 3．1 植物对农杆菌侵染的反应 | 第43-44页 |
| 3．2 抗生素对植株再生的影响 | 第44页 |
| 3．3 CED-9基因整合、表达检测和遗传稳定性 | 第44-45页 |
| 第四章 CED-9基因农杆菌介导水稻转化 | 第45-55页 |
| 1． 材料和方法 | 第45-49页 |
| 1．1 实验材料 | 第45页 |
| 1．2 实验方法 | 第45-47页 |
| 1．2．1 水稻愈伤的获取 | 第45-46页 |
| 1．2．2 水稻悬浮系的建立 | 第46页 |
| 1．2．3 农杆菌培养 | 第46页 |
| 1．2．4 共培养和抗性愈伤组织的选择 | 第46-47页 |
| 1．2．5 抗性愈伤组织的诱导分化和生根 | 第47页 |
| 1．3 培养基及试剂的配置 | 第47-49页 |
| 2． 结果和分析 | 第49-50页 |
| 2．1 水稻愈伤的培养 | 第49页 |
| 2．2 水稻悬浮系的建立 | 第49-50页 |
| 2．3 水稻愈伤组织的CED—9基因转化 | 第50页 |
| 3． 讨论 | 第50-55页 |
| 3．1 悬浮培养 | 第50-52页 |
| 3．1．1 一般技术 | 第50-51页 |
| 3．1．2 培养基 | 第51页 |
| 3．1．3 培养基的振荡 | 第51-52页 |
| 3．2 影响根癌农杆菌转化效率的一些因素 | 第52-55页 |
| 3．2．1 组培系统 | 第52页 |
| 3．2．2 农杆菌菌株 | 第52页 |
| 3．2．3 细菌的状态和浓度 | 第52页 |
| 3．2．4 筛选剂 | 第52-53页 |
| 3．2．5 农杆菌的抑制 | 第53页 |
| 3．2．6 共培养方式 | 第53-54页 |
| 3．2．7 分化 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
