| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| ·淀粉酶概述 | 第8-10页 |
| ·淀粉酶的定义及其分类 | 第8-9页 |
| ·中温型α-淀粉酶的来源及表达 | 第9-10页 |
| ·中温 α-淀粉酶 | 第10-13页 |
| ·中温 α-淀粉酶的性质及其编码基因的分析 | 第10-11页 |
| ·中温 α-淀粉酶的应用 | 第11-12页 |
| ·中温 α-淀粉酶的异源表达 | 第12-13页 |
| ·地衣芽孢杆菌表达系统 | 第13-15页 |
| ·地衣芽孢杆菌表达系统的特点 | 第13页 |
| ·地衣芽孢杆菌生产淀粉酶的研究进展 | 第13-14页 |
| ·地衣芽孢杆菌的遗传转化 | 第14-15页 |
| ·本课题的立题依据及研究内容 | 第15-17页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第17-27页 |
| ·实验材料 | 第17-20页 |
| ·菌株和质粒 | 第17页 |
| ·引物 | 第17页 |
| ·酶和试剂 | 第17-19页 |
| ·主要培养基 | 第19-20页 |
| ·仪器和设备 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20-27页 |
| ·芽孢杆菌染色体 DNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·引物设计和 PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·质粒的构建 | 第22页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第22页 |
| ·芽孢杆菌的质粒提取 | 第22-23页 |
| ·地衣芽孢杆菌的转化 | 第23页 |
| ·目标基因的删除 | 第23页 |
| ·重组地衣芽孢杆菌的发酵实验 | 第23-24页 |
| ·重组菌的遗传稳定性 | 第24页 |
| ·蛋白浓度检测 | 第24页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第24-25页 |
| ·重组酶的酶学性质 | 第25页 |
| ·DE 值的测定 | 第25-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-59页 |
| ·B. amyloliquefaciens M23 中温 -淀粉酶的检测 | 第27-28页 |
| ·B. amyloliquefaciens M23 的最适产酶温度 | 第27页 |
| ·B. amyloliquefaciens M23 的摇瓶发酵产酶水平 | 第27-28页 |
| ·中温 α-淀粉酶在 B. licheniformis CBBD302 中的异源表达 | 第28-31页 |
| ·表达中温α-淀粉酶的重组质粒 pBaA 的构建 | 第28-29页 |
| ·表达中温 α-淀粉酶的重组地衣芽孢杆菌 D302/pBaA 的构建 | 第29-30页 |
| ·重组地衣芽孢杆菌 D302/pBaA 中温 -淀粉酶的发酵性能分析 | 第30-31页 |
| ·中温 -淀粉酶在地衣芽孢杆菌淀粉酶缺失株 D402 中的表达 | 第31-38页 |
| ·中温 -淀粉酶基因删除突变盒的构建 | 第31-32页 |
| ·地衣芽孢杆菌 D302 原生质体转化方法的优化 | 第32-33页 |
| ·地衣芽孢杆菌淀粉酶基因缺失株 D402 的构建 | 第33-35页 |
| ·重组地衣芽孢杆菌 D402/pBaA 的构建 | 第35页 |
| ·重组地衣芽孢杆菌 D402/pBaA 中温 -淀粉酶的产酶性能分析 | 第35-37页 |
| ·重组地衣芽孢杆菌 D402/pBaA 的 30 L 罐发酵实验 | 第37-38页 |
| ·地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶缺失对提高中温 -淀粉酶表达水平的作用 | 第38-41页 |
| ·地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶基因缺失株 D502 的构建 | 第38-39页 |
| ·重组地衣芽孢杆菌 D502/pBaA 的构建 | 第39页 |
| ·地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶缺失株 D502/pBaA 表达中温 α-淀粉酶的性能 | 第39-40页 |
| ·重组地衣芽孢杆菌 D502/pBaA 的 30 L 罐发酵实验 | 第40-41页 |
| ·重组菌的遗传稳定性 | 第41页 |
| ·不同菌株 BAA 表达情况的比较 | 第41-43页 |
| ·重组 BAA 粗酶液的性能分析 | 第43-45页 |
| ·重组 BAA 粗酶液的性质分析 | 第43-44页 |
| ·加热灭酶对不同粗酶液的液化效果影响 | 第44-45页 |
| ·B. licheniformis D502/pBaA 的发酵优化 | 第45-53页 |
| ·B. licheniformis D502/pBaA 发酵条件的优化 | 第45-46页 |
| ·B. licheniformis D502/pBaA 发酵培养基的优化 | 第46-50页 |
| ·B. licheniformis D502/pBaA 最佳发酵培养基的确定 | 第50-52页 |
| ·B. licheniformis D502/pBaA 发酵优化后的摇瓶发酵实验 | 第52页 |
| ·B. licheniformis D502/pBaA 发酵优化后的 30 L 罐发酵实验 | 第52-53页 |
| ·重组中温 α-淀粉酶的分离纯化与酶学性质分析 | 第53-59页 |
| ·重组酶的分离纯化 | 第53-56页 |
| ·重组酶的酶学性质分析 | 第56-59页 |
| 主要结论与展望 | 第59-61页 |
| 主要结论 | 第59-60页 |
| 展望 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第67页 |
