| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-32页 |
| 1 玉米纹枯病研究进展 | 第12-14页 |
| ·玉米纹枯病的症状 | 第12-13页 |
| ·玉米纹枯病病原菌 | 第13页 |
| ·玉米纹枯病的侵染源与侵染途径 | 第13-14页 |
| ·玉米纹枯病菌的致病机制 | 第14页 |
| 2 玉米遗传转化系统研究进展 | 第14-25页 |
| ·玉米遗传转化的受体系统 | 第15-18页 |
| ·玉米遗传转化方法研究 | 第18-21页 |
| ·转基因技术在玉米育种上的应用 | 第21-24页 |
| ·抗虫转基因玉米 | 第21-22页 |
| ·抗病转基因玉米 | 第22-23页 |
| ·抗除草剂转基因玉米 | 第23页 |
| ·抗逆转基因玉米 | 第23-24页 |
| ·玉米遗传转化的标记基因 | 第24-25页 |
| 3 提高转基因植物中外源基因表达效率的途径 | 第25-27页 |
| ·启动子 | 第25-26页 |
| ·内含子 | 第26页 |
| ·起始密码子AUG周边区域的优化 | 第26页 |
| ·多基因转化策略 | 第26-27页 |
| 4 玉米抗纹枯病转基因育种研究进展 | 第27页 |
| 5 植物类甜蛋白(TLPs)基因和脂质转移蛋白基因(LTPs)基因研究进展 | 第27-31页 |
| ·病程相关蛋白定义及分类 | 第27-28页 |
| ·植物类甜蛋白(TLPs)基因研究进展 | 第28-30页 |
| ·植物类甜蛋白(TLPs)基因的结构和功能 | 第28-29页 |
| ·植物类甜蛋白(TLPs)基因在基因工程中的应用 | 第29-30页 |
| ·植物脂质转移蛋白(LTPs)基因的研究进展 | 第30-31页 |
| ·植物脂质转移蛋白(LTPs)基因的结构和功能 | 第30-31页 |
| ·植物脂质转移蛋白(LTPs)基因在基因工程中的应用 | 第31页 |
| 6 研究的目的及意义 | 第31-32页 |
| 第二章 双价植物表达载体构建 | 第32-68页 |
| 1 试验材料 | 第32-34页 |
| ·植物材料 | 第32页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·质粒载体 | 第32页 |
| ·各种酶及试剂 | 第32页 |
| ·载体构建过程所使用的引物 | 第32-33页 |
| ·培养基及试剂 | 第33-34页 |
| 2 试验方法 | 第34-54页 |
| ·双价植物表达载体(pCAMBIA3301-Ace-TLP)的构建 | 第34-52页 |
| ·水稻叶片总RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·水稻类甜蛋白基因TLP的RT-PCR | 第35-36页 |
| ·对目的基因TLP进行琼脂糖凝胶电泳 | 第36页 |
| ·TLP基因片段PCR产物的回收 | 第36-37页 |
| ·洋葱脂质转移蛋白基因Ace-AMP1的PCR扩增 | 第37-39页 |
| ·Ace-AMP1基因的T-A克隆 | 第39-40页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌DH5α细胞 | 第40-41页 |
| ·目的基因的鉴定 | 第41-42页 |
| ·碱裂解法小量提取质粒DNA | 第42页 |
| ·质粒和目的基因的酶切连接 | 第42-52页 |
| ·双价植物表达载体转化农杆菌EHA105 | 第52-54页 |
| ·农杆菌感受态的制备 | 第52-53页 |
| ·双价表达载体转化农杆菌EHA105(电转法) | 第53页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第53-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-67页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第54-59页 |
| ·水稻叶片总RNA的提取 | 第54页 |
| ·TLP基因的RT-PCR扩增 | 第54-55页 |
| ·Ace-AMP1基因的PCR扩增 | 第55-57页 |
| ·Ace-AMP1基因的T-A克隆、PCR验证及测序验证 | 第57-59页 |
| ·双价表达载体构建 | 第59-66页 |
| ·双价表达载体构建流程图 | 第59-60页 |
| ·双价表达载体的构建方法 | 第60-64页 |
| ·双价表达载体的最终鉴定 | 第64-66页 |
| ·双价表达载体(pCAMBIA3301-TLP-Ace)转化农杆菌 | 第66-67页 |
| 4 结论与讨论 | 第67-68页 |
| 第三章 农杆菌介导的玉米遗传转化 | 第68-80页 |
| 1 试验材料 | 第68-70页 |
| ·植物材料 | 第68页 |
| ·酶及试剂 | 第68页 |
| ·培养基 | 第68-69页 |
| ·所用试剂的配置 | 第69-70页 |
| 2 试验方法 | 第70-74页 |
| ·玉米的种植授粉 | 第70页 |
| ·幼胚的准备 | 第70-71页 |
| ·愈伤组织的诱导与继代 | 第71页 |
| ·农杆菌侵染液的准备 | 第71页 |
| ·农杆菌的侵染 | 第71-72页 |
| ·共培养 | 第72页 |
| ·恢复培养 | 第72页 |
| ·筛选培养 | 第72-73页 |
| ·诱导胚状体 | 第73页 |
| ·分化再生 | 第73页 |
| ·生根壮苗 | 第73页 |
| ·炼苗 | 第73页 |
| ·移栽 | 第73-74页 |
| 3 结果与分析 | 第74-78页 |
| 4 结论与讨论 | 第78-80页 |
| 第四章 转基因玉米的检测 | 第80-90页 |
| 1 试验材料 | 第80页 |
| ·菌株及试剂 | 第80页 |
| ·转基因植株分子检测所用的引物 | 第80页 |
| 2 试验方法 | 第80-85页 |
| ·转基因玉米的分子检测 | 第80-84页 |
| ·转基因玉米基因组DNA的提取(CTAB法) | 第80-81页 |
| ·再生植株的巢式PCR检测 | 第81-84页 |
| ·玉米转化株对纹枯病菌和除草剂的抗性鉴定 | 第84-85页 |
| ·T0代转基因玉米的抗除草剂检测 | 第84页 |
| ·纹枯病菌的活化 | 第84-85页 |
| ·T0代转基因玉米的抗纹枯病鉴定 | 第85页 |
| 3 结果与分析 | 第85-88页 |
| ·转基因玉米的分子检测 | 第85-87页 |
| ·转基因植株叶片DNA的提取 | 第85页 |
| ·转基因玉米的PCR检测 | 第85-87页 |
| ·转基因植株的抗除草剂鉴定 | 第87-88页 |
| ·转基因植株对纹枯病的抗性鉴定 | 第88页 |
| 4 结论与讨论 | 第88-90页 |
| 参考文献 | 第90-101页 |
| 附录 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
