酿酒酵母泛素化酶与去泛素化酶基因敲除及泛素结合结构域表达纯化
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 绪论 | 第8-16页 |
| ·泛素与泛素链 | 第8-9页 |
| ·泛素-蛋白酶体系统 | 第9-10页 |
| ·泛素活化酶 E1 | 第10页 |
| ·泛素结合酶 E2 | 第10-11页 |
| ·泛素连接酶 E3 | 第11-12页 |
| ·26S 蛋白酶体 | 第12页 |
| ·去泛素化酶 DUB | 第12-13页 |
| ·泛素结合结构域 UBD | 第13-14页 |
| ·研究的意义和内容 | 第14-16页 |
| 2 材料与仪器 | 第16-21页 |
| ·实验用菌株及质粒 | 第16页 |
| ·实验试剂与酶 | 第16-18页 |
| ·实验器材 | 第18页 |
| ·实验仪器 | 第18-19页 |
| ·培养基及溶液 | 第19-21页 |
| 3 实验方法 | 第21-35页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第21页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第21-22页 |
| ·菌落 PCR 鉴定卡那霉素抗性菌 | 第22页 |
| ·质粒提取 | 第22-23页 |
| ·基因敲除元件扩增 | 第23-24页 |
| ·酿酒酵母感受态细胞制备 | 第24-25页 |
| ·酵母高效转化 | 第25页 |
| ·酵母基因组 DNA 提取 | 第25-27页 |
| ·筛选阳性克隆 | 第27-28页 |
| ·阳性菌株保存 | 第28页 |
| ·质粒 pGEX（kt）-4Q2 构建 | 第28-32页 |
| ·GST-4Q2 融合蛋白表达 | 第32-33页 |
| ·样品制备 | 第33页 |
| ·SDS-PAGE | 第33-34页 |
| ·GST 融合蛋白纯化 | 第34-35页 |
| 4 实验结果与讨论 | 第35-41页 |
| ·基因敲除引物设计 | 第35页 |
| ·基因敲除元件扩增 | 第35-36页 |
| ·阳性克隆 PCR 验证 | 第36-37页 |
| ·pGEX（kt）-4Q2 质粒构建 | 第37-39页 |
| ·GST-4Q2 融合蛋白可溶性表达 | 第39页 |
| ·GST-4Q2 纯化 | 第39-41页 |
| 5 总结和展望 | 第41-42页 |
| 致谢 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 附录 | 第47-53页 |
