| 符号说明 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-28页 |
| ·禽流感的研究概述 | 第13-20页 |
| ·禽流感病毒的组成和复制 | 第13-15页 |
| ·血凝素 HA 的功能 | 第15-16页 |
| ·HA 的裂解与流感致病性的关系 | 第15页 |
| ·受体结合与释放的特异性 | 第15-16页 |
| ·神经氨酸酶 | 第16页 |
| ·内部基因的功能 | 第16-19页 |
| ·聚合酶蛋白 | 第16-17页 |
| ·核蛋白 | 第17页 |
| ·基质蛋白 | 第17-18页 |
| ·非结构蛋白 | 第18-19页 |
| ·H9N2 亚型低致病性禽流感的流行现状 | 第19-20页 |
| ·细胞因子概述 | 第20-23页 |
| ·干扰素的研究概述 | 第21页 |
| ·干扰素的命名及分类 | 第21-22页 |
| ·干扰素的基本特性 | 第22页 |
| ·干扰素的生物学活性 | 第22-23页 |
| ·白介素 18 的研究概述 | 第23-26页 |
| ·白介素18的生物学活性 | 第24-26页 |
| ·细胞因子的联合应用 | 第26页 |
| ·细胞因子用于预防与治疗的疾病潜力 | 第26-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-42页 |
| ·试验材料 | 第28-33页 |
| ·毒株和质粒 | 第28页 |
| ·细胞、受体菌与细胞培养基 | 第28页 |
| ·引物 | 第28-29页 |
| ·主要试剂 | 第29-30页 |
| ·培养基与主要试剂的配制方法 | 第30-32页 |
| ·各种培养基的配置 | 第30页 |
| ·琼脂糖凝胶及电泳溶液 | 第30-31页 |
| ·细胞培养试剂及 SDS-PAGE 试剂的配制 | 第31-32页 |
| ·主要仪器 | 第32页 |
| ·SPF 鸡胚 | 第32页 |
| ·分子生物学分析软件 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-42页 |
| ·鸡源 H9N2 亚型禽流感病毒株的分离鉴定与纯化 | 第33页 |
| ·样品采集 | 第33页 |
| ·病毒分离 | 第33页 |
| ·病毒在 MDCK 细胞上的适应和增殖 | 第33页 |
| ·病毒的纯化 | 第33页 |
| ·H9N2 亚型禽流感分离株的生物学特性 | 第33-34页 |
| ·病毒在 SPF 鸡胚中增殖的效价 | 第33页 |
| ·组织半数感染量的测定 | 第33-34页 |
| ·鸡胚半数感染量的测定 | 第34页 |
| ·H9N2 亚型禽流感的序列测定及系统进化分析 | 第34-35页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第34页 |
| ·反转录合成 cDNA | 第34页 |
| ·PCR 扩增各个基因片段 | 第34-35页 |
| ·PCR 产物鉴定与序列测序 | 第35页 |
| ·序列分析、核酸同源性比较、与进化树绘制 | 第35页 |
| ·鸡干扰素α与白介素 18 共表达转移载体的构建 | 第35-39页 |
| ·信号肽引物设计 | 第35-36页 |
| ·鸡干扰素α与白介素 18 的 PCR 扩增与克隆 | 第36页 |
| ·鸡干扰素α和白介素 18 基因的回收 | 第36-37页 |
| ·共表达转移载体的构建 | 第37页 |
| ·转移载体 HBM-CIFN-α&CIL-18 的质粒小提 | 第37页 |
| ·DH10Bac 感受态细胞的制备 | 第37-38页 |
| ·重组质粒 Bacmid 的构建 | 第38页 |
| ·重组质粒 Bacmid 的提取与鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组 Bacmid 转染 sf9 昆虫细胞及收获重组杆状病毒 | 第39-42页 |
| ·重组 Bacmid 转染 sf9 昆虫细胞 | 第39-40页 |
| ·重组杆状病毒的 DNA 的提取与 PCR 鉴定 | 第40-41页 |
| ·间接免疫荧光检测干扰素α和白介素 18 的共表达 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE 和 Western blot 检测鸡干扰素α和白介素 18 的共表达 | 第41页 |
| ·鸡干扰素α和白介素 18 共表达产物在 MDCK 细胞上对 H9N2 禽流感病毒的抑制作用 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-54页 |
| ·对于本实验室 2012 年送检病料统计结果 | 第42页 |
| ·H9N2 亚型禽流感病毒的分离与纯化 | 第42页 |
| ·H9N2 亚型禽流感病毒的生物学特性 | 第42页 |
| ·H9N2 亚型禽流感毒株的全基因测序与系统进化分析 | 第42-43页 |
| ·基因概况和系统进化分析 | 第43-50页 |
| ·HA 基因系统进化分析 | 第43-44页 |
| ·NA 基因系统进化分析 | 第44页 |
| ·M 基因系统进化分析 | 第44-45页 |
| ·NS 基因系统进化分析 | 第45-46页 |
| ·PB2 基因系统进化分析 | 第46页 |
| ·PB1 基因系统进化分析 | 第46-47页 |
| ·PA 基因系统进化分析 | 第47-48页 |
| ·NP 基因系统进化分析 | 第48页 |
| ·全基因组分析 | 第48-50页 |
| ·鸡干扰素α及白介素 18 融合蜂素信号肽成熟蛋白的扩增 | 第50页 |
| ·共表达载体的酶切鉴定及重组杆状病毒 PCR 结果 | 第50-51页 |
| ·间接免疫荧光检测鸡干扰素α和白介素 18 的共表达 | 第51-52页 |
| ·SDS-PAGE 和 Western blot 检测鸡干扰素α和白介素 18 的表达 | 第52-53页 |
| ·鸡干扰素α和白介素 18 对 H9N2 亚型禽流感病毒的抗病毒作用 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-57页 |
| ·H9N2 禽流感分离株的基本生物学特性及基因序列分析 | 第54页 |
| ·干扰素α与白介素 18 共表达及对 H9N2 亚型禽流感病毒的抗病毒作用 | 第54-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介及论文发表情况 | 第65页 |
