| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-11页 |
| 1 概述 | 第11-24页 |
| ·苏云金芽胞杆菌生物学特性 | 第11-14页 |
| ·Bt杀虫晶体对害虫的作用机制 | 第14-16页 |
| ·Cry1Ac蛋白的结构和功能的联系 | 第16-19页 |
| ·易错PCR技术 | 第19-22页 |
| ·立题依据和意义 | 第22-24页 |
| 2. 材料与方法 | 第24-38页 |
| ·材料 | 第24-29页 |
| ·菌株 | 第24页 |
| ·培养基以及抗生素 | 第24-25页 |
| ·Bt的培养条件 | 第25页 |
| ·生物昆虫 | 第25页 |
| ·易错PCR用试剂 | 第25页 |
| ·酶和引物 | 第25页 |
| ·PCR引物 | 第25-26页 |
| ·标准分子量 | 第26页 |
| ·试剂盒 | 第26页 |
| ·快速裂解用溶液 | 第26页 |
| ·电击转化用材料 | 第26页 |
| ·Bt质粒提取用试剂 | 第26页 |
| ·E.coli质粒提取试剂 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第27页 |
| ·SDS—PAGE电泳试剂 | 第27页 |
| ·热击转化感受态用溶液 | 第27-28页 |
| ·电击转化用溶液 | 第28页 |
| ·Cry1Ac蛋白提取所需试剂 | 第28页 |
| ·Cry1Ac蛋白纯化所需试剂 | 第28页 |
| ·实验使用的主要仪器和设备 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-38页 |
| ·易错PCR | 第29-30页 |
| ·构建pHT315ptAc质粒 | 第30-31页 |
| ·pHT315ptAc质粒的热击转化大肠杆菌Top10 | 第31-32页 |
| ·阳性转化子的鉴定 | 第32-33页 |
| ·pHT315ptAc质粒在Cry-B中的表达 | 第33-34页 |
| ·镜检和SDS—PAGE分析 | 第34-35页 |
| ·突变株生物活性测定及数据 | 第35-36页 |
| ·苏云金芽胞杆菌突变株2-23质粒提取 | 第36页 |
| ·突变株2-23中cry1Ac基因序列测定及突变位点分析 | 第36页 |
| ·突变株2-23 Cry1Ac蛋白三维结构预测及分析 | 第36-38页 |
| 3 结果 | 第38-50页 |
| ·易错PCR条件的选定 | 第38-40页 |
| ·快速裂解鉴定转化子实验 | 第40-41页 |
| ·突变菌株初筛、复筛及鉴定结果 | 第41-42页 |
| ·突变菌株2-23晶体SDS—PAGE检测 | 第42-43页 |
| ·突变菌株种重组质粒pHT315ptAc的鉴定 | 第43页 |
| ·生测结果及数据分析 | 第43-46页 |
| ·突变株2-23 cry1Ac基因序列比对及其蛋白三维结构分析 | 第46-50页 |
| 4 讨论 | 第50-55页 |
| 5 本研究的创新点和科学意义 | 第55-56页 |
| 6 今后的研究设想 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间撰写和发表的论文 | 第69-72页 |
