海南斑等蝎钾通道阻断剂Im58的克隆、表达、纯化和鉴定
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1 蝎与蝎毒素研究 | 第11-13页 |
| ·蝎毒素的组成与性质 | 第11-12页 |
| ·神经毒素种类及结构简介 | 第12-13页 |
| ·抗菌肽及蝎毒液其他蛋白组分简介 | 第13页 |
| 2 离子通道类型、功能和疾病研究 | 第13-19页 |
| ·离子通道概述 | 第13-15页 |
| ·离子通道疾病 | 第15-16页 |
| ·钾离子通道 | 第16-17页 |
| ·钾离子通道疾病 | 第17-18页 |
| ·自身免疫疾病与 Kv1.3 | 第18-19页 |
| 3 钾离子通道和蝎毒素相互作用研究 | 第19-20页 |
| 4 本论文工作的出发点 | 第20-21页 |
| 第二章 海南斑等蝎 Im58 克隆及结构分析 | 第21-28页 |
| 1 引言 | 第21页 |
| 2 实验材料与方法 | 第21-25页 |
| ·实验材料与试剂 | 第21页 |
| ·分子生物学软件及相关网站 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-25页 |
| ·PCR 引物设计 | 第22页 |
| ·Im58 基因扩增 | 第22-23页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第23页 |
| ·pGEX-4T-1 质粒的制备 | 第23页 |
| ·酶切 PCR 产物和表达载体 | 第23页 |
| ·双酶切产物纯化 | 第23-24页 |
| ·双酶切产物连接、转化 | 第24页 |
| ·鉴定阳性克隆子 | 第24-25页 |
| 3 实验结果与分析 | 第25-28页 |
| ·Im58 的序列分析 | 第25-26页 |
| ·Im58 载体构建 | 第26-27页 |
| ·小结 | 第27-28页 |
| 第三章 Im58 基因表达纯化及鉴定 | 第28-39页 |
| 1 引言 | 第28-29页 |
| 2 实验材料与方法 | 第29-31页 |
| ·实验材料与试剂 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-31页 |
| ·GST-Im58 融合蛋白 | 第29-30页 |
| ·蝎毒肽 Im58 的 RP-HPLC 纯化 | 第30页 |
| ·蝎毒肽 Im58 的冻干、鉴定 | 第30页 |
| ·全细胞实验鉴定 Im58 的活性 | 第30-31页 |
| 3 实验结果与分析 | 第31-39页 |
| ·GST-Im58 融合蛋白表达纯化 | 第31-32页 |
| ·GST-Im58 的 RP-HPLC 分离纯化 | 第32页 |
| ·GST-Im58 的 BCA 定量和分子量测定 | 第32-34页 |
| ·Im58 电生理鉴定 | 第34-36页 |
| ·Im58 对 Kv1.2 通道的电生理活性 | 第34页 |
| ·Im58 对 Kv1.3 通道的电生理活性 | 第34-36页 |
| ·小结 | 第36-39页 |
| 结论 | 第39-43页 |
| 参考文献 | 第43-48页 |
| 致谢 | 第48-49页 |
| 附录 攻读学位期间发表的论文 | 第49页 |
