| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 引言 | 第11-12页 |
| 1 综述 | 第12-19页 |
| ·辽宁新品系绒山羊 | 第12页 |
| ·毛囊结构 | 第12-13页 |
| ·毛囊生长变化 | 第13-14页 |
| ·GMPR2 研究进展 | 第14-15页 |
| ·褪黑激素 | 第15-17页 |
| ·角蛋白综述 | 第17-19页 |
| ·角蛋白结构 | 第17页 |
| ·角蛋白家族组成 | 第17-18页 |
| ·角蛋白家族研究进展 | 第18-19页 |
| 2 GMPR2 基因序列分析 | 第19-28页 |
| ·GMPR2 的生物信息学分析 | 第19-27页 |
| ·讨论 | 第27-28页 |
| 3 原位杂交 | 第28-36页 |
| ·实验样本 | 第28页 |
| ·实验试剂及仪器 | 第28-29页 |
| ·实验方法 | 第29-32页 |
| ·实验结果 | 第32-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| ·实验结果讨论 | 第34页 |
| ·实验注意事项 | 第34-36页 |
| 4 实时定量 PCR | 第36-41页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·实验试剂及仪器 | 第36页 |
| ·实验方法 | 第36-38页 |
| ·分离初次级毛囊 | 第36页 |
| ·初次级毛囊的总 RNA 提取 | 第36页 |
| ·反转录反应 | 第36页 |
| ·Real Time PCR | 第36-38页 |
| ·实验结果 | 第38-40页 |
| ·RNA 提取 | 第38-39页 |
| ·实时荧光定量 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-41页 |
| ·实验结果讨论 | 第40页 |
| ·实验注意事项 | 第40-41页 |
| 5 RT-PCR | 第41-46页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·实验样本 | 第41页 |
| ·实验试剂及仪器 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-43页 |
| ·皮肤、心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏总 RNA 的提取 | 第41页 |
| ·反转录反应 | 第41-42页 |
| ·PCR 反应 | 第42-43页 |
| ·实验结果 | 第43-45页 |
| ·RNA 提取 | 第43-44页 |
| ·RT-PCR | 第44-45页 |
| ·讨论 | 第45-46页 |
| ·结果讨论 | 第45页 |
| ·注意事项 | 第45-46页 |
| 6 褪黑激素处理 | 第46-51页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·实验样本 | 第46页 |
| ·实验试剂及仪器 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-48页 |
| ·取材 | 第47页 |
| ·原代培养 | 第47页 |
| ·传代培养 | 第47-48页 |
| ·退黑激素作用于羊耳成纤维细胞 | 第48页 |
| ·细胞中总 RNA 的提取 | 第48页 |
| ·反转录成 cDNA | 第48页 |
| ·Real Time PCR | 第48页 |
| ·实验结果 | 第48-49页 |
| ·RNA 提取 | 第48-49页 |
| ·实时定量 PCR | 第49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| ·结果讨论 | 第49-50页 |
| ·实验注意事项 | 第50-51页 |
| 7 K26 抗体制备 | 第51-78页 |
| ·实验材料 | 第51-55页 |
| ·实验样本 | 第51页 |
| ·实验器材 | 第51页 |
| ·实验耗材 | 第51-52页 |
| ·试剂配方 | 第52-55页 |
| ·实验方法 | 第55-66页 |
| ·信息学分析 | 第55页 |
| ·提取 RNA | 第55页 |
| ·反转录为 cDNA | 第55页 |
| ·PCR 反应 | 第55-56页 |
| ·产物纯化 | 第56-57页 |
| ·连接反应 | 第57页 |
| ·转化反应 | 第57-58页 |
| ·筛选后 PCR | 第58页 |
| ·提取质粒 | 第58-59页 |
| ·酶切反应 | 第59-60页 |
| ·连接反应 | 第60页 |
| ·转化反应 | 第60页 |
| ·诱导条件 | 第60-61页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第61-62页 |
| ·重组蛋白可溶性检测 | 第62页 |
| ·大量诱导 | 第62页 |
| ·重组蛋白纯化 | 第62-63页 |
| ·透析 | 第63-64页 |
| ·免疫动物 | 第64页 |
| ·抗血清效价检测 | 第64-65页 |
| ·提纯抗体 | 第65页 |
| ·抗体效价检测 | 第65页 |
| ·抗体特异性检测 | 第65-66页 |
| ·实验结果 | 第66-76页 |
| ·信息学分析结果 | 第66-68页 |
| ·提取 RNA | 第68-69页 |
| ·PCR 反应 | 第69-70页 |
| ·K26 菌落 PCR | 第70页 |
| ·K26 表达载体 | 第70-71页 |
| ·K26 蛋白原核表达 | 第71-72页 |
| ·可溶性检测 | 第72-73页 |
| ·蛋白纯化 | 第73-74页 |
| ·抗血清效价检测 | 第74-76页 |
| ·兔抗 K26 抗体特异性 | 第76页 |
| ·讨论 | 第76-78页 |
| ·原核表达载体系统 | 第76-77页 |
| ·选择目的基因片段 | 第77页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第77-78页 |
| 结论 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-84页 |
| 附录 A 原位杂交相关试剂配方 | 第84-86页 |
| 附录 B 不同时期 Actin、GMPR2 基因的扩增曲线和融解曲线图 | 第86-90页 |
| 附录 C 不同时间、不同浓度褪黑激素处理 Actin 基因、GMPR2 基因的扩增曲线和融解曲线图 | 第90-95页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
