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猪瘟病毒Npro蛋白核仁穿梭及其对病毒复制的影响

摘要第1-7页
Abstract第7-13页
英文缩略表第13-14页
第一章 引言第14-26页
   ·猪瘟与猪瘟病毒第14-16页
     ·猪瘟第14页
     ·猪瘟病毒第14-16页
   ·猪瘟病毒反向遗传技术的发展和应用第16-20页
     ·CSFV 反向遗传学技术的发展第16页
     ·在研究病毒毒力基因中的应用第16-17页
     ·在研究病毒复制机制中的应用第17-18页
     ·在猪瘟病毒标记活疫苗株构建中的应用第18-19页
     ·在诊断和病毒定量等中的应用第19-20页
   ·染色技术的发展和应用第20-21页
   ·病毒抵抗宿主抗病毒反应的策略第21-24页
     ·病毒逃逸宿主的天然免疫第21-22页
     ·病毒改变细胞内正常的细胞质与细胞核间的运输第22-23页
     ·病毒劫持核仁第23-24页
   ·本研究的目的与意义第24-26页
第二章 猪瘟病毒 N~(pro)蛋白核仁穿梭及其对病毒复制的影响第26-61页
   ·材料和方法第26-36页
     ·细胞、病毒、质粒、抗体和试剂第26页
     ·主要仪器设备第26-27页
     ·质粒构建第27-28页
     ·感染性克隆的构建和验证第28-31页
     ·转染试验第31页
     ·重组病毒的体内拯救第31页
     ·重组病毒的鉴定第31-34页
     ·病毒一步生长曲线的测定第34页
     ·TC 标记在重组猪瘟病毒基因组中的稳定性试验第34页
     ·FLAsH-EDT2 活细胞染色和免疫染色第34-35页
     ·共聚焦显微镜实时活细胞成像第35页
     ·细胞核蛋白和细胞浆蛋白分离试验第35页
     ·Western blot第35-36页
     ·双荧光素酶报告系统第36页
   ·结果第36-56页
     ·全长感染性克隆的验证第36-37页
     ·TC 标记猪瘟病毒的验证第37-42页
     ·TC 标记猪瘟病毒的一步生长曲线第42-43页
     ·N~(pro)蛋白的活细胞成像第43-44页
     ·N~(pro)蛋白核仁穿梭过程的实时追踪第44-45页
     ·N~(pro)蛋白定位于核仁第45-46页
     ·截短表达的 N~(pro)蛋白突变体定位于细胞核不定位于核仁第46-47页
     ·IRF3 阻碍 N~(pro)蛋白进入细胞核和核仁第47-49页
     ·N~(pro)蛋白核仁定位功能独立于其抑制干扰素产生的功能第49-50页
     ·IRF3 与 N~(pro)的融合不影响 N~(pro)蛋白的切割活性第50-51页
     ·突变体病毒 vSM-IRF3 和 vSM-D136N 的验证第51-54页
     ·突变体病毒 vSM-IRF3 表达的 IRF3-N~(pro)融合蛋白的定位第54页
     ·突变体病毒 vSM-IRF3 的滴度第54-55页
     ·突变体病毒 vSM-IRF3 的多步生长曲线第55-56页
     ·突变体病毒 vSM-IRF3 诱导较低的干扰素活性第56页
   ·讨论第56-61页
第三章 全文结论第61-62页
参考文献第62-72页
致谢第72-73页
作者简历第73页

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