| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第一章 前言 | 第16-26页 |
| ·病原菌 | 第16-23页 |
| ·迟缓爱德华氏菌简介 | 第16页 |
| ·迟缓爱德华氏菌分类、生化特征与分布 | 第16-18页 |
| ·迟缓爱德华氏菌病鱼类症状及鉴定 | 第18-19页 |
| ·毒力因子和致病机制 | 第19-21页 |
| ·Ⅲ型分泌系统和Ⅵ型分泌系统（T3SS 和 T6SS） | 第21-23页 |
| ·疫苗 | 第23-26页 |
| 第二章 迟缓爱德华氏菌表面抗原 Esa1 | 第26-48页 |
| ·引言 | 第26-28页 |
| ·鱼类肠道共生菌传递重组亚单位疫苗 FP3/pJsa1 的构建及免疫效应研究 | 第28-38页 |
| ·材料与方法 | 第28-31页 |
| ·菌株和生长条件 | 第28页 |
| ·克隆 esa1 | 第28页 |
| ·质粒和菌株的构建 | 第28-29页 |
| ·pETEsa1 的构建 | 第28页 |
| ·FP3/pJsa1 和 FP3/pJT 菌株的构建 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白的表达及纯化 | 第29页 |
| ·牙鲆 | 第29页 |
| ·免疫 | 第29-30页 |
| ·酶联免疫吸附测定法 | 第30页 |
| ·被动免疫 | 第30页 |
| ·蛋白质免疫印迹分析 | 第30-31页 |
| ·凝集实验 | 第31页 |
| ·FP3/pJsa1 在免疫鱼体中的克隆和扩散 | 第31页 |
| ·统计学分析 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-36页 |
| ·esa1 的序列特性 | 第31-32页 |
| ·Esa1 作为重组亚单位疫苗的免疫保护效果 | 第32页 |
| ·rEsa1 引起的血清抗体反应 | 第32-33页 |
| ·rEsa1 抗血清引起的被动免疫 | 第33页 |
| ·构建表达表面蛋白 Esa1 的共生菌株 | 第33-34页 |
| ·FP3/pJsa1 作为口服疫苗和注射疫苗的免疫反应 | 第34-35页 |
| ·口服 FP3/pJsa1 在牙鲆各组织中的存活及扩散 | 第35-36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| ·迟缓爱德华氏菌 DNA 疫苗 pCEsa1 的构建及免疫机制研究 | 第38-48页 |
| ·材料与方法 | 第38-41页 |
| ·菌株生长条件 | 第38页 |
| ·质粒的构建 | 第38页 |
| ·牙鲆 | 第38页 |
| ·免疫 | 第38-39页 |
| ·PCR 检测 DNA 疫苗在免疫牙鲆鱼体中的存在 | 第39页 |
| ·逆转录 PCR（RT-PCR）检测 DNA 疫苗在免疫牙鲆鱼体中的表达 | 第39页 |
| ·荧光定量 PCR（qRT-PCR）分析免疫相关基因的表达 | 第39页 |
| ·免疫胶体金检测 DNA 疫苗在免疫牙鲆鱼体内表达 | 第39-40页 |
| ·DNA 疫苗 pCEsa1 对巨噬细胞的免疫活性的影响 | 第40-41页 |
| ·头肾巨噬细胞的提取 | 第40页 |
| ·呼吸爆发 | 第40页 |
| ·酸性磷酸酶活性 | 第40页 |
| ·杀菌活性 | 第40-41页 |
| ·血清杀菌实验 | 第41页 |
| ·酶联免疫吸附测定法 | 第41页 |
| ·被动免疫 | 第41页 |
| ·数据分析 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-46页 |
| ·pCEsa1 的免疫保护效应 | 第41-43页 |
| ·Esa1 在免疫鱼肌肉中的表达 | 第41-43页 |
| ·pCEsa1 的免疫保护 | 第43页 |
| ·pCEsa1 引起的免疫效应 | 第43-46页 |
| ·巨噬细胞活性 | 第43-44页 |
| ·血清杀菌活性 | 第44页 |
| ·血清抗体反应及其对免疫保护作用的重要性 | 第44-45页 |
| ·免疫相关基因的表达 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| 第三章 迟缓爱德华氏菌重组亚单位疫苗 rEta2 和 DNA 疫苗 pCEta2 免疫保护效应及免疫机制比较研究 | 第48-59页 |
| ·引言 | 第48-49页 |
| ·材料和方法 | 第49-51页 |
| ·细菌菌株和生长条件 | 第49页 |
| ·eta2 的克隆 | 第49页 |
| ·质粒构建和准备 | 第49页 |
| ·重组蛋白的表达及纯化 | 第49页 |
| ·牙鲆 | 第49-50页 |
| ·免疫保护实验 | 第50页 |
| ·PCR 检测 DNA 疫苗在免疫牙鲆鱼体中的存在 | 第50页 |
| ·逆转录 PCR （RT-PCR）检测 DNA 疫苗在免疫牙鲆鱼体中的表达 | 第50页 |
| ·免疫胶体金检测 DNA 疫苗在免疫牙鲆鱼体内表达 | 第50页 |
| ·荧光定量 PCR （qRT-PCR）分析免疫相关基因的表达 | 第50页 |
| ·巨噬细胞免疫活性 | 第50-51页 |
| ·呼吸爆发 | 第50-51页 |
| ·酸性磷酸酶活性 | 第51页 |
| ·酶联免疫吸附测定法 | 第51页 |
| ·被动免疫 | 第51页 |
| ·数据分析 | 第51页 |
| ·数据搜索 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-57页 |
| ·Eta2 序列特征 | 第51页 |
| ·Eta2 重组亚单位疫苗免疫保护效应 | 第51-53页 |
| ·Eta2 作为 DNA 疫苗的免疫效应 | 第53-54页 |
| ·Eta2 在免疫鱼体组织中的表达 | 第53-54页 |
| ·pCEta2 引起的免疫反应 | 第54页 |
| ·rEta2 和 pCEta2 引起的免疫反应 | 第54-57页 |
| ·巨噬细胞活性 | 第54-55页 |
| ·血清抗体的产生 | 第55-56页 |
| ·免疫相关基因的表达 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 第四章 迟缓爱德华氏菌减毒疫苗 | 第59-78页 |
| ·前言 | 第59-60页 |
| ·迟缓爱德华氏菌减毒疫苗 TX5RM 的构建与评价 | 第60-69页 |
| ·材料与方法 | 第60-63页 |
| ·菌株及生长条件 | 第60页 |
| ·分离 TX5RM | 第60-61页 |
| ·菌株毒力分析 | 第61页 |
| ·全细胞蛋白分析 | 第61页 |
| ·牙鲆 | 第61页 |
| ·免疫 | 第61-63页 |
| ·酶联免疫吸附测定法 | 第63页 |
| ·数据分析 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-67页 |
| ·TX5 野生型与利福平突变菌株 TX5RM 生长状况与蛋白产物的比较 | 第63-64页 |
| ·TX5 野生型与利福平突变菌株 TX5RM 毒力方面的比较 | 第64-65页 |
| ·TX5RM 作为潜在的注射型疫苗 | 第65页 |
| ·TX5RM 作为潜在的口服疫苗和浸泡疫苗 | 第65-66页 |
| ·TX5RM 作为口服疫苗和浸泡疫苗在组织中的扩散 | 第66-67页 |
| ·TX5RM 产生的血清抗体反应 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| ·迟缓爱德华氏菌减毒疫苗 TX5RM 传递海豚链球菌 DNA 疫苗的新型交叉疫苗 | 第69-78页 |
| ·材料和方法 | 第69-72页 |
| ·菌株和生长条件 | 第69页 |
| ·TX5RMS10 和 TX5RMpCN3 的构建 | 第69-70页 |
| ·牙鲆 | 第70页 |
| ·免疫 | 第70-71页 |
| ·TX5RMS10 的组织入侵能力和基因稳定性分析 | 第71-72页 |
| ·DNA 疫苗在鱼组织中的表达 | 第72页 |
| ·酶联免疫吸附测定法 | 第72页 |
| ·荧光定量 PCR （qRT-PCR）分析免疫相关基因的表达 | 第72页 |
| ·数据分析 | 第72页 |
| ·结果和讨论 | 第72-78页 |
| ·TX5RMS10 对牙鲆组织的侵染能力和遗传稳定性研究 | 第72-73页 |
| ·DNA 疫苗在鱼类组织中的表达情况 | 第73-75页 |
| ·TX5RMS10 诱导交叉保护作用的研究 | 第75页 |
| ·TX5RMS10 诱导的免疫应答 | 第75-77页 |
| ·结论 | 第77-78页 |
| 第五章 多价灭活疫苗的构建及免疫效果评价 | 第78-86页 |
| ·前言 | 第78-79页 |
| ·材料和方法 | 第79-80页 |
| ·牙鲆 | 第79页 |
| ·免疫准备 | 第79-80页 |
| ·免疫 | 第80页 |
| ·酶联免疫反应分析 | 第80页 |
| ·血清杀菌试验 | 第80页 |
| ·数据分析 | 第80页 |
| ·结果和讨论 | 第80-86页 |
| ·四种单价灭活全菌疫苗及四价疫苗的保护效应 | 第80-82页 |
| ·三价和二价疫苗的保护效应 | 第82页 |
| ·血清抗体反应与杀菌实验 | 第82-84页 |
| ·迟缓爱德华和鳗弧菌病原菌的交叉酶联免疫反应和杀菌活性 | 第84-85页 |
| ·小结 | 第85-86页 |
| 第六章 迟缓爱德华氏菌基因 eta1 的功能研究 | 第86-101页 |
| ·前言 | 第86-87页 |
| ·材料与方法 | 第87-91页 |
| ·菌株和生长条件 | 第87页 |
| ·用于感染实验的牙鲆 | 第87页 |
| ·克隆 eta1 并且进行序列分析 | 第87页 |
| ·牙鲆头肾淋巴细胞提取 | 第87页 |
| ·qRT-PCR 分析法检测 eta1 基因表达 | 第87-88页 |
| ·质粒和菌株构建 | 第88页 |
| ·重组蛋白纯化与蛋白抗体制备 | 第88页 |
| ·Eta1 蛋白亚细胞定位 | 第88-89页 |
| ·免疫印迹反应 | 第88-89页 |
| ·免疫荧光实验 | 第89页 |
| ·组织侵染及致死率分析 | 第89页 |
| ·爱德华氏菌侵染宿主细胞实验 | 第89-90页 |
| ·qRT-PCR 分析爱德华氏菌侵染牙鲆免疫基因表达情况 | 第90页 |
| ·牙鲆淋巴细胞与 rEta1 的交互作用 | 第90页 |
| ·抗 rEta1 蛋白抗体对爱德华氏菌侵染的影响 | 第90页 |
| ·免疫实验 | 第90-91页 |
| ·酶联免疫吸附测定法 | 第91页 |
| ·数据分析 | 第91页 |
| ·核酸序列登记编号 | 第91页 |
| ·结果 | 第91-98页 |
| ·Etal 序列特征 | 第91页 |
| ·eta1 在体外以及感染过程中的表达分析 | 第91-92页 |
| ·Etal 的亚细胞定位 | 第92-94页 |
| ·Etal 突变的效应 | 第94-97页 |
| ·对组织扩散以及基本细菌毒力的影响 | 第94-95页 |
| ·TXetal 对宿主细胞以及细胞免疫反应的影响 | 第95-97页 |
| ·重组 rEta1 与牙鲆淋巴细胞结合 | 第97页 |
| ·Etal 抗体对 E.tarda 感染的影响 | 第97-98页 |
| ·rEta1 的免疫保护效应 | 第98页 |
| ·讨论 | 第98-101页 |
| 创新性及科学意义 | 第101-102页 |
| 参考文献 | 第102-122页 |
| 附录 | 第122-128页 |
| 作者简历 | 第128-129页 |
| 博士期间发表的文章及申请的专利 | 第129-130页 |
