| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-15页 |
| ·猪丹毒丝菌与猪丹毒 | 第11页 |
| ·猪丹毒丝菌的国内外研究现状及进展 | 第11-13页 |
| ·猪丹毒的流行情况 | 第11页 |
| ·猪丹毒丝菌的致病因子及其致病机理研究 | 第11-12页 |
| ·猪丹毒丝菌免疫保护性抗原的研究动态 | 第12-13页 |
| ·研究目的和意义 | 第13-14页 |
| ·主要研究内容与技术路线 | 第14-15页 |
| 第2章 猪丹毒丝菌 C43065 株 SpaA 保护区域的免疫学检测 | 第15-24页 |
| ·材料 | 第15-16页 |
| ·实验菌株和载体 | 第15页 |
| ·主要试剂 | 第15页 |
| ·主要仪器设备 | 第15-16页 |
| ·培养基 | 第16页 |
| ·方法 | 第16-19页 |
| ·PCR 引物设计 | 第16页 |
| ·细菌基因组 DNA 的制备 | 第16页 |
| ·C43065 株 spaA 基因的 PCR 扩增、克隆和测序 | 第16-17页 |
| ·spaA 基因 N 端免疫保护区域的 PCR 扩增、克隆和测序 | 第17页 |
| ·spaA 基因 C 端重复序列的 PCR 扩增、克隆和测序 | 第17页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第17-18页 |
| ·抗重组蛋白 rSpaA、rSpaA-N 和 rSpaA-C 抗体的制备 | 第18页 |
| ·重组蛋白的 Western 印迹检测 | 第18页 |
| ·检测重组蛋白 rSpaA、rSpaA-N 和 rSpaA-C 的保护作用 | 第18页 |
| ·免疫血清抗体效价的 ELISA 检测 | 第18-19页 |
| ·结果及分析 | 第19-23页 |
| ·PCR 扩增产物的琼脂糖电泳检测 | 第19页 |
| ·重组质粒 DNA 的构建和鉴定 | 第19-20页 |
| ·重组蛋白的表达和纯化 | 第20页 |
| ·重组蛋白 rSpaA 的免疫原性 | 第20-21页 |
| ·重组蛋白 rSpaA-N 的免疫原性 | 第21页 |
| ·重组蛋白 rSpaA-C 的免疫原性 | 第21页 |
| ·重组蛋白 rSpaA、rSpaA-N 和 rSpaA-C 蛋白的保护作用 | 第21-22页 |
| ·免疫血清抗体效价的 ELISA 检测 | 第22-23页 |
| ·讨论 | 第23-24页 |
| 第3章 猪丹毒丝菌 spaA 基因缺失突变株的构建及其鉴定 | 第24-31页 |
| ·材料 | 第24页 |
| ·菌株和质粒 | 第24页 |
| ·主要试剂和培养基 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-26页 |
| ·引物设计与目的基因片段的 PCR 扩增 | 第24-25页 |
| ·敲除载体 pUC18ΔspaA 的构建 | 第25页 |
| ·突变株的构建和初次筛选 | 第25-26页 |
| ·突变株基因组 DNA 的组合 PCR 及测序鉴定 | 第26页 |
| ·spaA 基因互补株的构建 | 第26页 |
| ·突变株的逆转录(RT)-PCR 鉴定 | 第26页 |
| ·突变株的 Western blot 鉴定 | 第26页 |
| ·结果及分析 | 第26-29页 |
| ·敲除载体 pUC18 spaA 的鉴定 | 第26-27页 |
| ·突变株 C43065ΔspaA 的初步筛选 | 第27页 |
| ·突变株 C43065ΔspaA 的组合 PCR 和 DNA 测序鉴定 | 第27-28页 |
| ·突变株 C43065ΔspaA 的 RT-PCR 鉴定 | 第28页 |
| ·突变株 C43065 spaA 的 Western blot 分析 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| 第4章 猪丹毒丝菌突变株 C43065 spaA 的生物学功能 | 第31-37页 |
| ·材料 | 第31页 |
| ·菌株和载体 | 第31页 |
| ·主要实验试剂和仪器 | 第31页 |
| ·方法 | 第31-33页 |
| ·生长速率的比较 | 第31页 |
| ·小鼠毒力试验 | 第31-32页 |
| ·补体依赖的细胞毒试验 | 第32页 |
| ·吞噬试验 | 第32页 |
| ·粘附试验 | 第32-33页 |
| ·结果及分析 | 第33-35页 |
| ·突变株 C43065 spaA 菌落和细菌形态 | 第33页 |
| ·突变株 C43065 spaA 生长曲线 | 第33页 |
| ·小鼠毒力试验 | 第33-34页 |
| ·补体依赖的细胞毒试验 | 第34-35页 |
| ·吞噬试验 | 第35页 |
| ·粘附试验 | 第35页 |
| ·讨论 | 第35-37页 |
| 结束语 | 第37-39页 |
| 结论 | 第37-38页 |
| 展望 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 作者在学期间取得的学术成果 | 第43页 |
