| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-26页 |
| ·硝基还原酶的分类与性质 | 第11-18页 |
| ·催化芳香硝基化合物的氧化还原酶 | 第11-13页 |
| ·细菌硝基还原酶的分类 | 第13-14页 |
| ·细菌硝基还原酶的结构 | 第14-17页 |
| ·细菌硝基还原酶的催化机制 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌硝基还原酶NfsA | 第18-24页 |
| ·NfsA的晶体结构 | 第18-19页 |
| ·NfsA的底物谱 | 第19-20页 |
| ·NfsA的辅酶偏好性 | 第20-22页 |
| ·NfsA的功能 | 第22-24页 |
| ·本论文的研究意义与内容 | 第24-26页 |
| ·选题依据 | 第24-25页 |
| ·研究内容 | 第25-26页 |
| 2 NfsA的基因获取与表达优化 | 第26-36页 |
| ·引言 | 第26页 |
| ·实验材料与方法 | 第26-29页 |
| ·提取E.coli K12菌株的基因组 | 第26页 |
| ·NfsA的克隆与克隆载体构建 | 第26-27页 |
| ·重组NfsA在E.coli BL21(DE3)中的表达优化 | 第27页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第27页 |
| ·Western Blot | 第27-28页 |
| ·NfsA重组蛋白的纯化 | 第28页 |
| ·蛋白浓度以及酶活力测定 | 第28-29页 |
| ·实验结果 | 第29-34页 |
| ·NfsA的基因获取与克隆载体构建 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌系统中表达产物的鉴定 | 第30-31页 |
| ·重组NfsA在E.coli BL2(DE3)中的表达优化 | 第31-32页 |
| ·重组NfsA的分离纯化 | 第32-34页 |
| ·NfsA酶活力的测定 | 第34页 |
| ·讨论 | 第34-35页 |
| ·本章小结 | 第35-36页 |
| 3 氨基酸残基Phe42对NfsA催化活性的影响 | 第36-52页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·实验材料与方法 | 第36-40页 |
| ·NfsA基于晶体结构的生物信息学分析 | 第36页 |
| ·NfsA 42位突变体的构建 | 第36-37页 |
| ·突变体F42Y、F42N和F42A的重组表达及分离纯化 | 第37页 |
| ·NfsA、F42Y、F42N和F42A的FMN孵育 | 第37-38页 |
| ·NfsA、F42Y、F42N和F42A的酶活力测定 | 第38页 |
| ·HPLC分析酶对芳香硝基底物的还原 | 第38页 |
| ·质谱分析酶还原TNT的产物 | 第38-39页 |
| ·NfsA、F42Y、F42N和F42A的动力学常数测定 | 第39页 |
| ·圆二色谱分析NfsA及其突变体的二级结构 | 第39-40页 |
| ·实验结果 | 第40-50页 |
| ·NfsA基于晶体结构的生物信息学分析 | 第40-41页 |
| ·NfsA 42位突变体的构建 | 第41-42页 |
| ·突变体F42Y、F42N和F42A的重组表达及分离纯化 | 第42-44页 |
| ·NfsA、F42Y、F42N和F42A的酶活力比较 | 第44页 |
| ·NfsA及其突变体还原芳香硝基底物的HPLC分析 | 第44-47页 |
| ·NfsA、F42Y、F42N和F42A的动力学常数分析 | 第47-49页 |
| ·远紫外圆二色谱分析NfsA及其突变体的二级结构 | 第49-50页 |
| ·分析讨论 | 第50-51页 |
| ·本章小结 | 第51-52页 |
| 4 NfsA辅酶偏好性的研究 | 第52-61页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·实验材料与方法 | 第52-54页 |
| ·GroupA家族和GroupB家族氨基酸序列比对 | 第52页 |
| ·R15A、K167A、R203A和R203D的构建、表达及分离纯化 | 第52-53页 |
| ·R15A、K167A、R203A和R203D的酶活力检测 | 第53-54页 |
| ·R15A、K167A、R203A和R203D的动力学测定 | 第54页 |
| ·实验结果与讨论 | 第54-58页 |
| ·Group A家族和Group B家族氨基酸序列比对 | 第54-56页 |
| ·R15A、K167A、R203A和R203D的构建、表达及分离纯化 | 第56-57页 |
| ·NfsA、R15A、K167A、R203A和R203D的酶活力比较 | 第57-58页 |
| ·R15A、K167A、R203A和R203D的动力学常数分析 | 第58页 |
| ·分析讨论 | 第58-59页 |
| ·本章小结 | 第59-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-67页 |
| 附录A NfsA的DNA序列与编码的氨基酸序列 | 第67-68页 |
| 附录B：缩略词表 | 第68-69页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
