致谢 | 第1-7页 |
目录 | 第7-10页 |
摘要 | 第10-11页 |
Summary | 第11-13页 |
第一章 文献综述 | 第13-26页 |
·番茄斑萎病毒属病毒分子生物学研究进展 | 第13-17页 |
·番茄斑萎病毒属病毒的分类 | 第13-15页 |
·番茄斑萎病毒属病毒的基因组结构 | 第15-16页 |
·生物学特征 | 第16-17页 |
·病毒细胞间运动模式 | 第17-24页 |
·运动蛋白/核酸(MP/RNA)复合体模式 | 第19-20页 |
·管状结构模式 | 第20-21页 |
·三基因盒模式 | 第21-22页 |
·双生病毒模式 | 第22-24页 |
·选题的意义、研究内容和目标 | 第24-26页 |
·选题的意义 | 第24-25页 |
·研究内容和目标 | 第25-26页 |
第二章 番茄斑萎病毒和番茄环纹斑点病毒的细胞病理变化比较观察 | 第26-37页 |
·材料和方法 | 第27-29页 |
·材料 | 第27页 |
·病株材料 | 第27页 |
·试剂 | 第27页 |
·仪器 | 第27页 |
·方法 | 第27-29页 |
·常规化学固定和包埋 | 第27-28页 |
·高压冷冻固定和冷冻替代 | 第28页 |
·样品的超薄切片 | 第28页 |
·超薄切片的染色 | 第28-29页 |
·超薄切片的电镜观察 | 第29页 |
·结果与分析 | 第29-35页 |
·化学固定感染TSWV的植物叶细胞病理变化 | 第29-31页 |
·化学固定感染TZSV的植物叶细胞病理变化 | 第31-32页 |
·高压冷冻固定感染TSWV的植物叶细胞病理变化 | 第32-35页 |
·小结与讨论 | 第35-37页 |
第三章 TSWV和TZSV运动蛋白在植物细胞内的定位 | 第37-49页 |
·材料和方法 | 第37-44页 |
·材料 | 第37-38页 |
·方法 | 第38-44页 |
·病毒的接种 | 第38页 |
·病毒基因组的抽提 | 第38-39页 |
·cDNA第一链合成 | 第39页 |
·TSWV和TZSV NSm目的片段的获得 | 第39-40页 |
·DNA克隆技术 | 第40-41页 |
·重组质粒的提取和鉴定 | 第41-42页 |
·重组表达载体导入农杆菌C58C1 | 第42-43页 |
·农杆菌培养和浸润 | 第43页 |
·激光共聚焦显微镜观察 | 第43-44页 |
·结果与分析 | 第44-47页 |
·重组质粒构建的鉴定结果 | 第44页 |
·NSm在本氏烟表皮细胞内的定位 | 第44-47页 |
·小结与讨论 | 第47-49页 |
第四章 TSWV和TZSV运动蛋白在昆虫细胞内的表达 | 第49-59页 |
·材料和方法 | 第50-52页 |
·材料 | 第50页 |
·方法 | 第50-52页 |
·PCR扩增目的基因 | 第50页 |
·重组病毒的构建 | 第50-52页 |
·Lipofectin介导重组病毒转染昆虫细胞 | 第52页 |
·感染昆虫细胞 | 第52页 |
·激光共聚焦显微镜观察 | 第52页 |
·结果与分析 | 第52-57页 |
·Bacmid-NSm的构建 | 第52-53页 |
·NSm在昆虫Tn细胞内的表达 | 第53-56页 |
·TSWV和TZSV序列比对结果 | 第56-57页 |
·小结与讨论 | 第57-59页 |
第五章 TSWV和TZSV运动蛋白的原核表达及抗体制备 | 第59-71页 |
·材料与方法 | 第59-65页 |
·材料 | 第59页 |
·方法 | 第59-65页 |
·常规PCR反应 | 第59-60页 |
·原核表达载体的构建 | 第60页 |
·目的基因在大肠杆菌中的表达 | 第60-61页 |
·表达产物在变性条件下的纯化 | 第61-62页 |
·重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第62-63页 |
·多克隆抗体的制备 | 第63-64页 |
·Western印迹分析 | 第64-65页 |
·结果与分析 | 第65-70页 |
·TSWV、TZSV NSm基因的克隆和原核表达载体的构建 | 第65页 |
·TSWV、TZSV运动蛋白的原核表达 | 第65-67页 |
·TSWV、TZSV运动蛋白的大量表达及纯化 | 第67-70页 |
·小结与讨论 | 第70-71页 |
全文小结 | 第71-73页 |
参考文献 | 第73-78页 |
附录A 本论文中所用缩写与中英文对照 | 第78-81页 |
附录B:常用试剂的配制 | 第81-86页 |
附录C:常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第86-87页 |