| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| ·基因表达调控 | 第11-12页 |
| ·转录因子的功能 | 第11页 |
| ·转录因子的结构 | 第11-12页 |
| ·与逆境胁迫相关转录因子的研究 | 第12-17页 |
| ·NAC类转录因子 | 第12-13页 |
| ·ERF类转录因子 | 第13页 |
| ·WRKY类转录因子 | 第13-14页 |
| ·C_2H_2类转录因子C_2H_2 | 第14页 |
| ·MYB类转录因子 | 第14-15页 |
| ·bZIP类转录因子 | 第15-17页 |
| ·冬小麦抗寒性有关研究 | 第17-18页 |
| ·研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 材料 | 第19-30页 |
| ·试验材料 | 第19页 |
| ·试验设计 | 第19页 |
| ·试验试剂和仪器 | 第19-20页 |
| ·冬小麦7种转录因子在冷胁迫下表达差异的分析 | 第20-24页 |
| ·RNA的提取 | 第20-21页 |
| ·RNA纯度的分析 | 第21页 |
| ·DNase Ⅰ消化RNA中的基因组DNA | 第21页 |
| ·反转录 | 第21-22页 |
| ·cDNA浓度的调节和ReaL-timePCR引物的效率分析 | 第22页 |
| ·ReaL-time PCR分析 | 第22-24页 |
| ·数据分析方法 | 第24页 |
| ·基因的克隆及原核表达 | 第24-28页 |
| ·PCR扩增目的基因 | 第24页 |
| ·PCR产物的回收 | 第24页 |
| ·克隆载体的构建 | 第24-25页 |
| ·表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·目的蛋白的制备 | 第26-28页 |
| ·凝胶阻滞(EMSA)试验 | 第28-30页 |
| ·探针标记 | 第28页 |
| ·检测探针标记效率 | 第28页 |
| ·DNA片段与蛋白结合检测 | 第28-30页 |
| 3 结果 | 第30-40页 |
| ·两种冬小麦7种转录因子在冷胁迫下表达差异的分析 | 第30-35页 |
| ·RNA的纯度分析结果 | 第30页 |
| ·实时荧光定量PCR扩增曲线和溶解曲线分析 | 第30-31页 |
| ·冷胁迫下7种转录因子基因的表达分析 | 第31-35页 |
| ·TaOBF1转录因子的原核表达 | 第35-38页 |
| ·TaOBF1基因的扩增 | 第35-36页 |
| ·重组质粒pMD18-T-TaOBF1的构建及酶切鉴定 | 第36页 |
| ·重组质粒pMD18-T-TaOBF1插入基因的序列测定及结果分析 | 第36页 |
| ·pET-32b-TaOBF1表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·重组表达载体插入基因的序列测定及结果分析 | 第37页 |
| ·原核表达目的蛋白 | 第37-38页 |
| ·目的蛋白的纯化 | 第38页 |
| ·凝胶阻滞实验(EMSA) | 第38-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| ·冷胁迫对转录因子在两种冬小麦中表达的影响 | 第40页 |
| ·Real-time PCR反应的稳定性和可靠性 | 第40页 |
| ·表达体系的选择和优化 | 第40-41页 |
| ·蛋白结构分析 | 第41-43页 |
| 5 结论 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第51页 |
