柑橘中冷胁迫相关miRNAs的克隆与鉴定
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 前言 | 第11页 |
| 2 植物冷胁迫的研究进展 | 第11-14页 |
| ·植物冷胁迫的生理反应机制 | 第11-12页 |
| ·CBF与植物冷驯化 | 第12页 |
| ·冷胁迫下的植物分子信号转导 | 第12-13页 |
| ·冷胁迫有关的生化物质 | 第13-14页 |
| ·冷胁迫相关的基因和miRNAs | 第14页 |
| 3 miRNA的研究进展 | 第14-19页 |
| ·miRNA的生物合成 | 第14-15页 |
| ·miRNA生物合成的调节 | 第15-16页 |
| ·miRNA的作用机制 | 第16页 |
| ·miRNA与植物的抗逆性 | 第16-17页 |
| ·植物miRNA的特点 | 第17-18页 |
| ·miRNA与siRNA | 第18页 |
| ·miRNA与植物激素及信号转导 | 第18-19页 |
| 4 研究目标和意义 | 第19-20页 |
| 5 技术路线 | 第20-21页 |
| 第二章 柑橘中冷胁迫相关miRNAs的筛选 | 第21-29页 |
| 1 前言 | 第21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-22页 |
| ·芯片数据 | 第21-22页 |
| ·柑橘中冷胁迫相关的miRNAs靶基因的预测 | 第22页 |
| ·miRNAs前体预测 | 第22页 |
| ·启动子分析 | 第22页 |
| 3 结果与分析 | 第22-28页 |
| 4 讨论 | 第28-29页 |
| 第三章 柑橘中冷胁迫相关miRNAs前体的克隆 | 第29-34页 |
| 1 前言 | 第29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-32页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·仪器和主要试剂 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-32页 |
| ·柑橘叶片中总RNA的提取与纯化 | 第29-30页 |
| ·RNA质量检测与浓度测定 | 第30页 |
| ·RT-PCR对柑橘中miRNA前体的鉴定 | 第30-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-33页 |
| ·RNA提取电泳检测结果 | 第32页 |
| ·RT-PCR对miRNAs前体的鉴定结果 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-34页 |
| 第四章 不同方法鉴定miRNA成熟体 | 第34-40页 |
| 1 前言 | 第34页 |
| 2 材料与方法 | 第34-37页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·仪器和主要试剂 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·柑橘叶片中总RNA的提取与纯化 | 第35页 |
| ·小分子miRNA的分离 | 第35页 |
| ·小分子miRNA加poly(A)尾反应 | 第35页 |
| ·RT-PCR | 第35-36页 |
| ·stem loop RT-PCR | 第36页 |
| ·PCR产物测序 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-38页 |
| 4 讨论 | 第38-40页 |
| 第五章 柑橘中冷胁迫相关的miRNAs的表达分析 | 第40-48页 |
| 1 前言 | 第40页 |
| 2 材料与方法 | 第40-44页 |
| ·材料处理 | 第40页 |
| ·仪器和主要试剂 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-44页 |
| ·柑橘叶片中RNA的提取与纯化 | 第40-41页 |
| ·内参基因的选择 | 第41页 |
| ·PCR循环数的确定 | 第41-42页 |
| ·PCR体系的优化 | 第42页 |
| ·不同时间冷胁迫下柑橘中miRNAs的差异表达 | 第42-44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-56页 |
| 附录1 | 第56-57页 |
| 附录2 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 作者简历 | 第59页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第59页 |
