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中国对虾蛋白Rab7与WSSV囊膜蛋白VP28的共定位及其作用区域解析

摘要第1-7页
ABSTRACT第7-15页
引言第15-17页
第一章 绪论第17-22页
 1 对虾白斑综合征病毒(WSSV)研究概况第17-18页
 2 WSSV 囊膜蛋白在 WSSV 感染中的研究进展第18-19页
   ·囊膜蛋白在 WSSV 侵染中的作用第18页
   ·囊膜蛋白及其受体的相互作用第18-19页
 3 Rab7 蛋白的研究现状第19-20页
 4 展望第20-22页
第二章 中国对虾 Rab7 基因全长 cDNA 的克隆与序列分析第22-37页
 1 材料与方法第22-29页
   ·中国对虾第22页
   ·实验用仪器和主要试剂第22页
   ·中国对虾鳃组织总 RNA 的提取和 cDNA 第一链的合成第22-24页
   ·同源克隆 pcrab7 基因的部分片段第24页
   ·RACE 获得全长 cDNA 序列第24-28页
   ·pcrab7 全长 cDNA 序列分析及其编码的氨基酸序列的生物信息学分析第28-29页
 2 结果第29-36页
   ·同源克隆获得 pcrab7 基因的部分片段第29页
   ·pcrab7 的 5'-RACE 和 3'-RACE第29-31页
   ·pcrab7 基因序列特征第31-32页
   ·PcRab7 蛋白结构特征分析第32-33页
   ·中国对虾 Rab7 基因及其同源基因的分子系统学分析第33-34页
   ·不同种类 Rab7 蛋白保守性分析第34-36页
 3 讨论第36-37页
第三章 中国对虾 Rab7 蛋白的原核表达与多克隆抗体制备第37-50页
 1 材料与方法第38-45页
   ·质粒和菌种第38页
   ·实验用仪器和主要试剂第38页
   ·质粒 pBAD/ gIIIA 的制备第38-39页
   ·PcRab7 基因的扩增第39页
   ·表达载体 pBAD/ gIIIA-pcrab7 的构建第39-41页
   ·PcRab7 的诱导表达、鉴定及纯化第41-44页
   ·重组 PcRab7 蛋白的 Bradford 法定量第44-45页
   ·PcRab7 多克隆抗体的制备第45页
 2 结果第45-49页
   ·pBAD/ gIIIA 质粒与 PcRab7 目的片段的制备第45-46页
   ·表达载体 pBAD/ gIIIA-pcrab7 的构建第46-47页
   ·pcrab7 基因表达产物分析第47-48页
   ·重组蛋白 PcRab7 的纯化和复性第48页
   ·纯化的重组 PcRab7 蛋白定量第48页
   ·兔抗 PcRab7 多克隆抗体的制备第48-49页
 3 讨论第49-50页
第四章 中国对虾 Rab7 蛋白与 WSSV-VP28 的作用及结合位点的分析第50-79页
 1 材料与方法第50-65页
   ·菌种和蛋白第50-51页
   ·实验用仪器和主要试剂第51页
   ·VP28 基因的扩增第51-52页
   ·重组表达载体 pBAD/ gIIIA-VP28 的构建第52-54页
   ·VP28 的诱导表达、鉴定及纯化第54-55页
   ·Dynabeads 磁珠结合法分析 PcRab7 蛋白与 VP28 蛋白的结合第55-56页
   ·PcRab7 蛋白与 VP28 蛋白的具体作用区域的分析第56-65页
 2 结果第65-77页
   ·VP28 基因重组表达载体的构建第65-66页
   ·VP28 基因表达产物分析第66-67页
   ·重组蛋白 VP28 的纯化和复性第67页
   ·Dynabeads 磁珠鉴定 VP28 与 PcRab7 蛋白的结合第67-68页
   ·PcRab7 蛋白与 VP28 蛋白的具体作用位点第68-73页
   ·PcRab7-2 蛋白与 VP28 蛋白的结合作用第73-77页
 3 讨论第77-79页
第五章 中国对虾 Rab7 与 WSSV-VP28 在中国对虾血淋巴细胞中的定位第79-87页
 1 材料与方法第79-81页
   ·实验动物第79页
   ·实验用仪器和主要试剂第79-80页
   ·抗体和蛋白的荧光标记第80页
   ·中国对虾血淋巴细胞的培养第80页
   ·免疫荧光细胞化学染色第80-81页
   ·激光共聚焦显微镜观察第81页
 2.结果第81-85页
   ·PcRab7 在血淋巴细胞的定位第81-83页
   ·PcRab7 与 VP28 在血淋巴细胞的共定位第83-85页
 3.讨论第85-87页
结论第87-88页
参考文献第88-97页
附录第97-100页
致谢第100-101页
攻读学位期间的科研成果第101页

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