摘要 | 第1-7页 |
ABSTRACT | 第7-15页 |
引言 | 第15-17页 |
第一章 绪论 | 第17-22页 |
1 对虾白斑综合征病毒(WSSV)研究概况 | 第17-18页 |
2 WSSV 囊膜蛋白在 WSSV 感染中的研究进展 | 第18-19页 |
·囊膜蛋白在 WSSV 侵染中的作用 | 第18页 |
·囊膜蛋白及其受体的相互作用 | 第18-19页 |
3 Rab7 蛋白的研究现状 | 第19-20页 |
4 展望 | 第20-22页 |
第二章 中国对虾 Rab7 基因全长 cDNA 的克隆与序列分析 | 第22-37页 |
1 材料与方法 | 第22-29页 |
·中国对虾 | 第22页 |
·实验用仪器和主要试剂 | 第22页 |
·中国对虾鳃组织总 RNA 的提取和 cDNA 第一链的合成 | 第22-24页 |
·同源克隆 pcrab7 基因的部分片段 | 第24页 |
·RACE 获得全长 cDNA 序列 | 第24-28页 |
·pcrab7 全长 cDNA 序列分析及其编码的氨基酸序列的生物信息学分析 | 第28-29页 |
2 结果 | 第29-36页 |
·同源克隆获得 pcrab7 基因的部分片段 | 第29页 |
·pcrab7 的 5'-RACE 和 3'-RACE | 第29-31页 |
·pcrab7 基因序列特征 | 第31-32页 |
·PcRab7 蛋白结构特征分析 | 第32-33页 |
·中国对虾 Rab7 基因及其同源基因的分子系统学分析 | 第33-34页 |
·不同种类 Rab7 蛋白保守性分析 | 第34-36页 |
3 讨论 | 第36-37页 |
第三章 中国对虾 Rab7 蛋白的原核表达与多克隆抗体制备 | 第37-50页 |
1 材料与方法 | 第38-45页 |
·质粒和菌种 | 第38页 |
·实验用仪器和主要试剂 | 第38页 |
·质粒 pBAD/ gIIIA 的制备 | 第38-39页 |
·PcRab7 基因的扩增 | 第39页 |
·表达载体 pBAD/ gIIIA-pcrab7 的构建 | 第39-41页 |
·PcRab7 的诱导表达、鉴定及纯化 | 第41-44页 |
·重组 PcRab7 蛋白的 Bradford 法定量 | 第44-45页 |
·PcRab7 多克隆抗体的制备 | 第45页 |
2 结果 | 第45-49页 |
·pBAD/ gIIIA 质粒与 PcRab7 目的片段的制备 | 第45-46页 |
·表达载体 pBAD/ gIIIA-pcrab7 的构建 | 第46-47页 |
·pcrab7 基因表达产物分析 | 第47-48页 |
·重组蛋白 PcRab7 的纯化和复性 | 第48页 |
·纯化的重组 PcRab7 蛋白定量 | 第48页 |
·兔抗 PcRab7 多克隆抗体的制备 | 第48-49页 |
3 讨论 | 第49-50页 |
第四章 中国对虾 Rab7 蛋白与 WSSV-VP28 的作用及结合位点的分析 | 第50-79页 |
1 材料与方法 | 第50-65页 |
·菌种和蛋白 | 第50-51页 |
·实验用仪器和主要试剂 | 第51页 |
·VP28 基因的扩增 | 第51-52页 |
·重组表达载体 pBAD/ gIIIA-VP28 的构建 | 第52-54页 |
·VP28 的诱导表达、鉴定及纯化 | 第54-55页 |
·Dynabeads 磁珠结合法分析 PcRab7 蛋白与 VP28 蛋白的结合 | 第55-56页 |
·PcRab7 蛋白与 VP28 蛋白的具体作用区域的分析 | 第56-65页 |
2 结果 | 第65-77页 |
·VP28 基因重组表达载体的构建 | 第65-66页 |
·VP28 基因表达产物分析 | 第66-67页 |
·重组蛋白 VP28 的纯化和复性 | 第67页 |
·Dynabeads 磁珠鉴定 VP28 与 PcRab7 蛋白的结合 | 第67-68页 |
·PcRab7 蛋白与 VP28 蛋白的具体作用位点 | 第68-73页 |
·PcRab7-2 蛋白与 VP28 蛋白的结合作用 | 第73-77页 |
3 讨论 | 第77-79页 |
第五章 中国对虾 Rab7 与 WSSV-VP28 在中国对虾血淋巴细胞中的定位 | 第79-87页 |
1 材料与方法 | 第79-81页 |
·实验动物 | 第79页 |
·实验用仪器和主要试剂 | 第79-80页 |
·抗体和蛋白的荧光标记 | 第80页 |
·中国对虾血淋巴细胞的培养 | 第80页 |
·免疫荧光细胞化学染色 | 第80-81页 |
·激光共聚焦显微镜观察 | 第81页 |
2.结果 | 第81-85页 |
·PcRab7 在血淋巴细胞的定位 | 第81-83页 |
·PcRab7 与 VP28 在血淋巴细胞的共定位 | 第83-85页 |
3.讨论 | 第85-87页 |
结论 | 第87-88页 |
参考文献 | 第88-97页 |
附录 | 第97-100页 |
致谢 | 第100-101页 |
攻读学位期间的科研成果 | 第101页 |