| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 縮略语表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-24页 |
| ·蓝藻与藻胆体 | 第11-12页 |
| ·藻胆蛋白 | 第12-14页 |
| ·藻胆色素的生物合成 | 第14-16页 |
| ·光敏色素 | 第16-18页 |
| ·荧光蛋白的研究进展 | 第18-19页 |
| ·毕赤酵母的研究进展 | 第19-23页 |
| ·毕赤酵母的优势 | 第20页 |
| ·毕赤酵母的表达宿主菌 | 第20-21页 |
| ·毕赤酵母的表达载体 | 第21页 |
| ·毕赤酵母的密码子分析 | 第21页 |
| ·外源基因的表达 | 第21-22页 |
| ·毕赤酵母表达系统的局限性 | 第22-23页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 绿色荧光蛋白的定位标记 | 第24-37页 |
| ·引言 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第24-25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·所用试剂 | 第25-26页 |
| ·实验仪器 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-33页 |
| ·菌种的活化和培养 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和质粒转化 | 第28页 |
| ·碱裂解法抽提质粒 | 第28页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第28-29页 |
| ·引物设计和标准PCR扩增 | 第29-30页 |
| ·表达载体pCDFDuet-mreb：gfp的构建 | 第30-31页 |
| ·质粒pCDFDuet-mreb：gfp在原核生物中表达 | 第31页 |
| ·含His-tag融合标签蛋白的亲和纯化 | 第31-32页 |
| ·融合蛋白的活性检测 | 第32-33页 |
| ·结果与分析 | 第33-36页 |
| ·重组质粒pCDFDuet-mreb:gfp的双酶切检测 | 第33页 |
| ·融合蛋白荧光显微镜的检验 | 第33-34页 |
| ·融合蛋白的吸收光谱和荧光光谱分析 | 第34-35页 |
| ·融合蛋白的SDS-PAGE检测 | 第35-36页 |
| ·小结与讨论 | 第36-37页 |
| 第三章 绿色荧光蛋白和藻蓝色素相关基因在酵母中表达 | 第37-53页 |
| ·引言 | 第37页 |
| ·实验材料 | 第37-39页 |
| ·菌株和质粒 | 第37-38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·所用试剂 | 第38-39页 |
| ·实验仪器 | 第39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| ·菌种的活化和培养 | 第39-40页 |
| ·重组酵母载体的构建 | 第40页 |
| ·重组酵母载体的线性化 | 第40-41页 |
| ·线性化重组载体转化到毕赤酵母 | 第41页 |
| ·毕赤酵母电转化法 | 第41-43页 |
| ·毕赤酵母工程菌的构建 | 第43-44页 |
| ·毕赤酵母工程菌的活性检测 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-52页 |
| ·重组质粒双酶切检测 | 第44-45页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第45-46页 |
| ·酵母菌阳性转化子的PCR验证 | 第46-47页 |
| ·酵母菌阳性转化子的荧光显微镜检验 | 第47-48页 |
| ·酵母菌阳性转化子的荧光光谱和吸收光谱分析 | 第48-50页 |
| ·酵母菌阳性转化子SDS-PAGE检测 | 第50-52页 |
| ·小结与讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 毕赤酵母双色荧光蛋白表达体系的构建 | 第53-66页 |
| ·前言 | 第53页 |
| ·实验材料 | 第53-54页 |
| ·菌株和质粒 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53-54页 |
| ·所用试剂 | 第54页 |
| ·实验仪器 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-57页 |
| ·重组载体pPIC3.5K-f0：gtp(△SacI)：pcyA的构建 | 第54-55页 |
| ·重组载体pPICZB：abp1：gaf3：ho1的构建 | 第55页 |
| ·酵母重组载体线性化 | 第55页 |
| ·酵母菌单色荧光蛋白体系的构建 | 第55-56页 |
| ·酵母菌双色荧光蛋白体系的构建 | 第56页 |
| ·工程菌诱导表达 | 第56页 |
| ·工程菌细胞破碎 | 第56-57页 |
| ·工程菌检测 | 第57页 |
| ·结果与分析 | 第57-64页 |
| ·重组质粒双酶切检测 | 第57-58页 |
| ·酵母阳性转化子的PCR验证 | 第58-59页 |
| ·酵母阳性转化子的显微镜检测 | 第59-62页 |
| ·酵母阳性转化子的荧光光谱和吸收光谱分析 | 第62-64页 |
| ·小结与讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 附录 附图 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
