产气荚膜梭菌plc和NetB基因的表达及单克隆抗体制备与鉴定
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-19页 |
| ·产气荚膜梭菌的主要毒素 | 第11-12页 |
| ·产气荚膜梭菌毒素的作用方式 | 第12-14页 |
| ·具有损伤细胞膜作用的毒素 | 第12-13页 |
| ·具有形成微孔作用的毒素 | 第13页 |
| ·以不明方式作用于细胞膜的毒素 | 第13页 |
| ·具有细胞内活性的毒素 | 第13-14页 |
| ·水解酶 | 第14页 |
| ·坏死性肠炎 | 第14-16页 |
| ·NE临床症状与病理变化 | 第14-15页 |
| ·α毒素与NE | 第15页 |
| ·NetB毒素与NE | 第15-16页 |
| ·NE疫苗的研究进展 | 第16页 |
| ·单克隆抗体技术 | 第16-17页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-38页 |
| ·实验材料 | 第19-23页 |
| ·实验动物及细胞 | 第19页 |
| ·菌株和质粒 | 第19页 |
| ·培养基和分子生物学试剂 | 第19页 |
| ·主要试剂的配制 | 第19-22页 |
| ·仪器设备 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-38页 |
| ·目的基因重组质粒的构建 | 第23-27页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第28-30页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第30-34页 |
| ·单克隆抗体的生物学活性鉴定 | 第34-37页 |
| ·数据统计 | 第37-38页 |
| 3 结果 | 第38-51页 |
| ·PCR扩增plc基因与NetB基因 | 第38页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38-41页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定与双酶切鉴定 | 第38-40页 |
| ·重组质粒的序列鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第41-42页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第42-44页 |
| ·间接ELISA检测方法的建立 | 第42页 |
| ·细胞融合 | 第42-43页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选与建立 | 第43页 |
| ·腹水的制备与纯化 | 第43-44页 |
| ·单克隆抗体的生物学活性鉴定 | 第44-51页 |
| ·单克隆抗体效价与浓度的测定 | 第44-45页 |
| ·单克隆抗体的Western blot鉴定 | 第45-46页 |
| ·间接ELISA检测分泌单克隆抗体稳定性 | 第46-47页 |
| ·杂交瘤细胞的染色体计数 | 第47页 |
| ·小鼠单克隆抗体Ig亚类鉴定 | 第47页 |
| ·免疫荧光试验 | 第47页 |
| ·体外中和试验 | 第47-51页 |
| 4 讨论 | 第51-55页 |
| ·重组质粒的构建及诱导表达 | 第51页 |
| ·杂交瘤细胞的融合及筛选 | 第51-52页 |
| ·杂交瘤细胞的扩大培养 | 第52-53页 |
| ·腹水的制备及纯化 | 第53页 |
| ·单克隆抗体生物学特性的鉴定 | 第53-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65页 |
