| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 缩略词表 | 第15-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-37页 |
| 1 抑制素研究进展 | 第16-21页 |
| ·抑制素简述 | 第16页 |
| ·抑制素分子结构特征 | 第16页 |
| ·抑制素对生殖活动的调节及其作用机制 | 第16-19页 |
| ·抑制素对雌性动物生殖的影响 | 第19页 |
| ·抑制素对雄性动物生殖的影响 | 第19-21页 |
| 2 卵泡发育中分子和细胞的调控机制研究 | 第21-25页 |
| ·细胞表达的相关生长因子的调控作用 | 第21-23页 |
| ·卵巢细胞增殖分化在卵泡发育过程中作用 | 第23-25页 |
| 3 精子发生的分子和细胞调控机制研究 | 第25-35页 |
| ·精子发生的过程 | 第25-26页 |
| ·精子发生的基因表达调控 | 第26-33页 |
| ·睾丸支持细胞在精子发生中的作用 | 第33-35页 |
| 4 研究目的与意义 | 第35-37页 |
| 第二章 小鼠睾丸第一波精子发生过程中抑制素mRNA和蛋白时空表达规律 | 第37-47页 |
| 1 前言 | 第37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-43页 |
| ·材料 | 第37-39页 |
| ·实验材料 | 第37页 |
| ·主要仪器设备 | 第37-38页 |
| ·主要试剂 | 第38页 |
| ·主要溶液及相关缓冲液 | 第38-39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·小鼠睾丸组织总RNA的提取及检测 | 第39页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第39-40页 |
| ·睾丸不同时间段抑制素各亚基mRNA相对表达量分析 | 第40页 |
| ·睾丸组织INHA蛋白的Western blot分析 | 第40-43页 |
| ·统计分析 | 第43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-45页 |
| ·睾丸组织总RNA质量 | 第43页 |
| ·Inha,Inhba,Inhbb在睾丸发育不同时间的相对表达量分析 | 第43-44页 |
| ·INHA蛋白在睾丸发育不同时间的表达量分析 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 5 小结 | 第46-47页 |
| 第三章 抑制素RNAi对体外培养小鼠睾丸支持细胞生长发育和精子发生相关基因的作用 | 第47-65页 |
| 1 前言 | 第47-48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-55页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·实验材料 | 第48页 |
| ·主要仪器设备 | 第48页 |
| ·干扰载体 | 第48-49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·主要溶液及相关缓冲液 | 第49页 |
| ·方法 | 第49-55页 |
| ·小鼠支持细胞的分离与培养 | 第49-50页 |
| ·Inha基因RNAi重组干扰质粒构建 | 第50-52页 |
| ·重组质粒克隆及提取 | 第52页 |
| ·重组质粒转染小鼠支持细胞 | 第52-53页 |
| ·重组质粒转染支持细胞的共聚焦检测 | 第53页 |
| ·转染后支持细胞总RNA提取及检测 | 第53页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第53页 |
| ·转染后支持细胞相关基因相对表达量分析 | 第53-54页 |
| ·转染后支持细胞相关蛋白的Western blot分析 | 第54-55页 |
| ·转染后支持细胞细胞周期检测 | 第55页 |
| ·转染后支持细胞分泌抑制素B检测 | 第55页 |
| ·统计分析 | 第55页 |
| 3 结果与分析 | 第55-61页 |
| ·Inha RNAi重组质粒酶切及测序鉴定 | 第55-56页 |
| ·Inha RNAi重组质粒转染小鼠支持细胞 | 第56-57页 |
| ·支持细胞总RNA质量 | 第57-58页 |
| ·Inha RNAi重组质粒的效果鉴定 | 第58页 |
| ·Inha沉默影响支持细胞细胞周期 | 第58-59页 |
| ·Inha沉默对支持细胞相关蛋白表达的影响 | 第59-60页 |
| ·Inha沉默对支持细胞相关基因mRNA表达的影响 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| ·抑制素RNAi效果显著 | 第61页 |
| ·抑制素对支持细胞周期的调控 | 第61-62页 |
| ·抑制素与精子发生相关基因的表达作用 | 第62-63页 |
| 5 小结 | 第63-65页 |
| 第四章 抑制素RNAi对小鼠卵巢颗粒细胞中生长发育机制的研究 | 第65-79页 |
| 1. 前言 | 第65-66页 |
| 2 材料与方法 | 第66-69页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·主要仪器设备 | 第66页 |
| ·主要试剂 | 第66页 |
| ·主要溶液及相关缓冲液 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-69页 |
| ·小鼠卵巢颗粒细胞的分离和培养 | 第66页 |
| ·Inha基因RNAi重组干扰质粒构建 | 第66-67页 |
| ·重组质粒克隆及提取 | 第67页 |
| ·重组质粒转染小鼠颗粒细胞 | 第67页 |
| ·重组质粒转染小鼠颗粒细胞的共聚焦检测 | 第67页 |
| ·转染后小鼠颗粒细胞总RNA提取及检测 | 第67页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第67页 |
| ·转染后颗粒细胞相关基因相对表达量分析 | 第67-68页 |
| ·转染后颗粒细胞相关蛋白的Western blot分析 | 第68页 |
| ·转染后颗粒细胞凋亡检测 | 第68-69页 |
| ·转染后颗粒细胞细胞周期检测 | 第69页 |
| ·颗粒细胞转染后抑制素B和激活素A的检测 | 第69页 |
| ·统计分析 | 第69页 |
| 3 结果与分析 | 第69-75页 |
| ·Inha RNAi重组质粒转染小鼠颗粒细胞 | 第69-70页 |
| ·颗粒细胞总RNA质量 | 第70-71页 |
| ·Inha RNAi重组质粒的效果鉴定 | 第71-72页 |
| ·Inha沉默诱导颗粒细胞凋亡 | 第72页 |
| ·Inha沉默影响颗粒细胞周期 | 第72-73页 |
| ·Inha沉默对颗粒细胞相关蛋白表达的影响 | 第73-74页 |
| ·Inha沉默对颗粒细胞相关基因mRNA表达的影响 | 第74-75页 |
| 4 讨论 | 第75-77页 |
| ·抑制素RNAi效果显著 | 第75页 |
| ·抑制素调控颗粒细胞生长发育机制 | 第75-76页 |
| ·抑制素的分子调控 | 第76页 |
| ·抑制素与类固醇合成 | 第76-77页 |
| 5 小结 | 第77-79页 |
| 第五章 小鼠卵巢注射法研究抑制素RNAi质粒的表达 | 第79-90页 |
| 1 前言 | 第79页 |
| 2 材料与方法 | 第79-85页 |
| ·材料 | 第79-80页 |
| ·实验材料 | 第79页 |
| ·主要仪器设备 | 第79页 |
| ·主要试剂 | 第79页 |
| ·主要溶液及相关缓冲液 | 第79-80页 |
| ·方法 | 第80-85页 |
| ·重组质粒的导入(卵巢直接注射法) | 第80-82页 |
| ·注射后卵巢总RNA提取及检测 | 第82-83页 |
| ·第一链cDNA的合成 | 第83页 |
| ·Inha基因相对表达量分析 | 第83页 |
| ·卵巢组织石蜡切片 | 第83-84页 |
| ·卵巢组织石蜡切片HE染色 | 第84页 |
| ·免疫组化检测重组质粒GFP的表达 | 第84-85页 |
| ·统计分析 | 第85页 |
| 3 结果与分析 | 第85-88页 |
| ·卵巢组织总RNA质量 | 第85-86页 |
| ·GFP在手术后卵巢组织表达分析 | 第86-87页 |
| ·手术后小鼠卵巢发育的检测 | 第87页 |
| ·Inha在手术后卵巢组织不同时间的相对表达量分析 | 第87-88页 |
| 4 讨论 | 第88-89页 |
| 5 小结 | 第89-90页 |
| 结论 | 第90-92页 |
| 研究创新点与不足 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-122页 |
| 发表的主要论文 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
