磷酸苏氨酸裂解酶SpvC的晶体结构与功能研究
| 目录 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 研究概述 | 第8-21页 |
| ·研究背景及意义 | 第8-13页 |
| ·沙门氏菌简介 | 第9-10页 |
| ·有关SPV基因簇的背景简介 | 第10-11页 |
| ·有关MAPKs的背景简介 | 第11-13页 |
| ·蛋白质晶体学简介 | 第13-14页 |
| ·研究方法 | 第14-16页 |
| ·原核表达体系的研究和应用 | 第16-18页 |
| ·概述 | 第16-17页 |
| ·pET表达系统 | 第17-18页 |
| ·蛋白纯化 | 第18-21页 |
| ·亲和柱纯化 | 第18-20页 |
| ·快速液相色谱纯化 | 第20-21页 |
| 第二章 SpvC的晶体结构研究 | 第21-56页 |
| ·引言 | 第21页 |
| ·实验设计 | 第21-22页 |
| ·基因克隆、蛋白表达和纯化 | 第22-52页 |
| ·实验材料 | 第22-26页 |
| (1) 质粒构建所需材料 | 第22页 |
| (2) 感受态细胞制备所需材料 | 第22-23页 |
| (3) 小规模DNA制备所需材料 | 第23页 |
| (4) SDS-PAGE电泳所需材料 | 第23页 |
| (5) 试剂和工具酶 | 第23-25页 |
| (6) western所用试剂 | 第25页 |
| (7) 主要仪器 | 第25-26页 |
| ·基本原理 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-40页 |
| (1) 基因克隆 | 第27-32页 |
| (2) 表达和检测 | 第32-33页 |
| (3) 大量表达和纯化(4℃冷室) | 第33-35页 |
| (4) Se-Met蛋白衍生物的制备 | 第35-36页 |
| (5) Western杂交 | 第36-37页 |
| (6) 蛋白质浓度测定: Bradford法 | 第37-38页 |
| (7) 悬滴法生长晶体的一般方法 | 第38-39页 |
| (8) 目的蛋白限制性酶切分析 | 第39-40页 |
| ·实验检测及主要结果 | 第40-52页 |
| (1) SpvC与GST融合蛋白的表达及纯化结果 | 第40-45页 |
| (2) rERK2蛋白的表达及纯化结果 | 第45-46页 |
| (3) 共转化结果 | 第46-51页 |
| (4) 质谱分析 | 第51-52页 |
| ·晶体生长和优化 | 第52-53页 |
| ·晶体衍射数据的收集和处理 | 第53-54页 |
| ·SpvC的晶体结构初步分析 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 第三章 SpvC的结构功能分析讨论 | 第56-62页 |
| ·SpvC晶体结构研究 | 第56-58页 |
| ·Western Blot检测结果 | 第58-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| ·下一步工作及新的共转化结果 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 附录 | 第65页 |
| 缩略语表 | 第65-67页 |
| 引物序列 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
