| 图形目录 | 第1-13页 |
| 表格目录 | 第13-14页 |
| 摘要 | 第14-16页 |
| Abstract | 第16-18页 |
| 第一章 黄孢原毛平革菌木质素过氧化物酶基因(lipC)转录调控因子的筛选 | 第18-56页 |
| 摘要 | 第19-20页 |
| 1 引言 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-34页 |
| ·实验材料 | 第21-26页 |
| ·真菌菌种 | 第21页 |
| ·大肠杆菌菌种 | 第21页 |
| ·P.chrysosporium的培养基 | 第21-23页 |
| ·酵母培养基 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌培养基 | 第24页 |
| ·质粒载体 | 第24-25页 |
| ·引物及钓饵序列 | 第25-26页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-34页 |
| ·P.chrysosporium的培养 | 第26页 |
| ·总RNA的提取和mRNA的分离纯化 | 第26-27页 |
| ·SMART cDNA的合成及纯化 | 第27-28页 |
| ·钓饵质粒的构建 | 第28-29页 |
| ·酵母感受态细胞的制备 | 第29页 |
| ·3-AT浓度的优化 | 第29-30页 |
| ·酵母单杂交文库的构建 | 第30页 |
| ·酵母单杂交文库的筛选 | 第30页 |
| ·酵母质粒DNA的提取 | 第30-31页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备和转化 | 第31页 |
| ·质粒DNA提取 | 第31-32页 |
| ·核酸的电泳检测 | 第32-33页 |
| ·序列分析 | 第33-34页 |
| 3 结果 | 第34-48页 |
| ·酵母单杂交文库的构建及筛选 | 第34页 |
| ·RNA提取及质量检测 | 第34页 |
| ·合成cDNA的质量检测 | 第34-36页 |
| ·钓饵质粒的构建 | 第36页 |
| ·酵母单杂交筛选P.chryosoporium 3d cDNA文库 | 第36-37页 |
| ·阳性克隆的序列测定及同源性分析 | 第37-48页 |
| 4 讨论 | 第48-52页 |
| ·基因转录调控反式作用因子的研究策略 | 第48-49页 |
| ·基因转录调控反式作用因子的结构特点 | 第49-51页 |
| ·lipC基因转录调控反式作用因子的分析 | 第51-52页 |
| 小结 | 第52-53页 |
| References | 第53-56页 |
| 第二章 黄孢原毛平革菌中与14-3-3蛋白相互作用蛋白基因的筛选 | 第56-89页 |
| 摘要 | 第57-58页 |
| 1 引言 | 第58-59页 |
| 2 材料与方法 | 第59-67页 |
| ·实验材料 | 第59-62页 |
| ·真菌菌种 | 第59-60页 |
| ·培养基 | 第60页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第60页 |
| ·质粒载体 | 第60-62页 |
| ·实验方法 | 第62-67页 |
| ·E.coli转化 | 第62页 |
| ·质粒DNA提取 | 第62-63页 |
| ·DNA操作 | 第63页 |
| ·cDNA合成与cDNA文库的构建 | 第63-64页 |
| ·重组钓饵质粒的构建 | 第64页 |
| ·自激活和毒性检测 | 第64页 |
| ·3-AT浓度的优化 | 第64-65页 |
| ·接合实验(mating)筛选阳性克隆 | 第65页 |
| ·阳性克隆片段的分类 | 第65页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性检测 | 第65-66页 |
| ·阳性克隆的验证 | 第66-67页 |
| 3 结果 | 第67-80页 |
| ·酵母双杂交文库的构建及筛选策略 | 第67页 |
| ·酵母双杂交cDNA文库质量评估 | 第67-69页 |
| ·酵母双杂交阳性克隆的筛选 | 第69-70页 |
| ·阳性克隆的验证 | 第70-72页 |
| ·阳性克隆片段的分类 | 第72-73页 |
| ·序列测定及序列分析 | 第73-80页 |
| 4 讨论 | 第80-84页 |
| ·酵母双杂交cDNA文库的构建 | 第80-82页 |
| ·14-3-3蛋白的功能 | 第82-84页 |
| 小结 | 第84-85页 |
| References | 第85-89页 |
| 第三章 酵母单、双杂交阳性克隆的生物信息学分析 | 第89-112页 |
| 摘要 | 第90-91页 |
| 1 引言 | 第91-92页 |
| 2 材料与方法 | 第92-94页 |
| ·数据来源 | 第92页 |
| ·主要分析软件及网络资源 | 第92-94页 |
| ·分析软件 | 第92页 |
| ·基因组定位及全长cDNA的预测 | 第92页 |
| ·网络资源 | 第92-94页 |
| 3 结果 | 第94-107页 |
| ·生物信息学分析策略 | 第94-95页 |
| ·核苷酸序列的同源比对和基因组定位 | 第95页 |
| ·氨基酸序列的同源比对及进化树分析 | 第95-97页 |
| ·蛋白质基本性质分析 | 第97-102页 |
| ·蛋白质基本常数分析 | 第97-100页 |
| ·蛋白质信号肽预测 | 第100页 |
| ·蛋白质跨膜区预测 | 第100-102页 |
| ·蛋白质亚细胞定位分析 | 第102页 |
| ·酵母双杂交阳性克隆的磷酸化位点分析 | 第102页 |
| ·启动子、转录调控区分析 | 第102-103页 |
| ·功能位点分析 | 第103-105页 |
| ·蛋白质三维结构预测 | 第105-107页 |
| 4 讨论 | 第107-109页 |
| ·酵母单杂交阳性克隆的生物信息学分析 | 第107页 |
| ·酵母双杂交阳性克隆的生物信息学分析 | 第107-109页 |
| 小结 | 第109-110页 |
| References | 第110-112页 |
| 第四章 多功能蛋白14-3-3与顺式调控元件的体外结合分析 | 第112-132页 |
| 摘要 | 第113-114页 |
| 1 引言 | 第114-115页 |
| 2 材料与方法 | 第115-123页 |
| ·实验材料 | 第115-117页 |
| ·菌种 | 第115页 |
| ·质粒 | 第115-116页 |
| ·培养基 | 第116-117页 |
| ·主要试剂和酶类 | 第117页 |
| ·引物序列 | 第117页 |
| ·实验方法 | 第117-123页 |
| ·E.coli转化 | 第117页 |
| ·质粒DNA提取 | 第117页 |
| ·DNA操作 | 第117-118页 |
| ·重组质粒的诱导表达 | 第118页 |
| ·His-tag融合蛋白纯化 | 第118-119页 |
| ·变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS—PAGE) | 第119-120页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶的考马斯亮蓝染色 | 第120页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第120页 |
| ·DNA探针的标记 | 第120页 |
| ·DNA探针与菌丝体总蛋白离体结合试验 | 第120-121页 |
| ·迁移率转换凝胶电泳 | 第121页 |
| ·凝胶放射性自显影 | 第121-122页 |
| ·RT-PCR分析14-3-3基因转录水平 | 第122-123页 |
| 3 结果 | 第123-126页 |
| ·表达质粒的构建 | 第123-124页 |
| ·14-3-3基因表达产物的SDS-PAGE分析 | 第124页 |
| ·14-3-3蛋白的电泳迁移率转换分析 | 第124-125页 |
| ·14-3-3基因在不同培养阶段的转录分析 | 第125-126页 |
| 4 讨论 | 第126-128页 |
| ·凝胶延迟电泳分析DNA-蛋白质结合 | 第126页 |
| ·14-3-3蛋白在lipC基因转录调控中的作用 | 第126-128页 |
| 小结 | 第128-129页 |
| References | 第129-132页 |
| 文献综述 | 第132-176页 |
| 摘要 | 第135-136页 |
| 第一部分 酵母双杂交系统研究进展 | 第136-150页 |
| 引言 | 第136页 |
| 1 酵母双杂交系统概述 | 第136-138页 |
| ·酵母双杂交系统的基本原理 | 第136-137页 |
| ·特点与优点 | 第137-138页 |
| 2 应用酵母双杂交系统操作的基本程序 | 第138页 |
| 3 酵母双杂交系统的局限性和改进 | 第138-139页 |
| 4 酵母双杂交系统的发展 | 第139-144页 |
| ·酵母单杂交系统 | 第140-141页 |
| ·反向酵母双杂交系统 | 第141页 |
| ·酵母三杂交系统 | 第141-142页 |
| ·逆向双杂交系统 | 第142页 |
| ·双诱饵系统 | 第142-143页 |
| ·哺乳动物的双杂交系统 | 第143页 |
| ·非转录读出特点的酵母双杂交系统 | 第143-144页 |
| 5 主要应用研究进展 | 第144-149页 |
| ·研究蛋白质间的相互作用 | 第144页 |
| ·研究蛋白质组及建立蛋白质图谱 | 第144-146页 |
| ·研究细胞信号转导 | 第146-147页 |
| ·在病毒学研究中的应用 | 第147页 |
| ·筛选药物和寻找药物靶标 | 第147-148页 |
| ·疾病机理分析 | 第148页 |
| ·研究基础分子生物学问题 | 第148-149页 |
| 6 展望 | 第149-150页 |
| 第二部分 14-3-3蛋白研究进展 | 第150-166页 |
| 引言 | 第150页 |
| 1 14-3-3蛋白家族的种类 | 第150-151页 |
| 2 14-3-3蛋白分子结构 | 第151-153页 |
| 3 14-3-3蛋白识别序列 | 第153-154页 |
| ·磷酸化丝氨酸/苏氨酸识别序列 | 第153-154页 |
| ·非磷酸化识别序列 | 第154页 |
| 4 14-3-3蛋白和配体相互作用的特点 | 第154-155页 |
| 5 14-3-3蛋白的调控机制 | 第155-156页 |
| 6 14-3-3蛋白的生物学功能 | 第156-162页 |
| ·14-3-3蛋白与细胞周期 | 第156-157页 |
| ·14-3-3蛋白与细胞凋亡 | 第157-158页 |
| ·14-3-3蛋白与信号转导 | 第158-159页 |
| ·14-3-3蛋白与线粒体、叶绿体前体蛋白跨膜转运 | 第159-160页 |
| ·功能与表达的多样性 | 第160页 |
| ·蛋白质-蛋白质相互作用 | 第160-161页 |
| ·与蛋白激酶构成复合体 | 第161页 |
| ·与转录因子相互作用 | 第161-162页 |
| ·与H+-ATPase的作用 | 第162页 |
| 7 14-3-3蛋白与疾病 | 第162-163页 |
| 8 14-3-3蛋白的细胞定位 | 第163-164页 |
| 9 展望 | 第164-166页 |
| References | 第166-176页 |
| 在读期间发表或被接收的论文 | 第176-177页 |
| 致谢 | 第177-178页 |
