| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 第一章 盐藻在不同盐浓度胁迫条件下多糖产量的变化 | 第12-19页 |
| 1 材料和方法 | 第12-14页 |
| ·材料 | 第12-13页 |
| ·藻种 | 第12页 |
| ·仪器 | 第12页 |
| ·试剂 | 第12页 |
| ·盐藻培养基 | 第12-13页 |
| ·方法 | 第13-14页 |
| ·盐藻培养 | 第13页 |
| ·盐藻的胁迫培养 | 第13页 |
| ·盐藻多糖的提取 | 第13页 |
| ·盐藻多糖浓度的测定 | 第13页 |
| ·标准曲线的建立 | 第13-14页 |
| 2.结果及分析 | 第14-17页 |
| ·盐藻生长状况测定 | 第14页 |
| ·多糖测定标准曲线的建立 | 第14-15页 |
| ·盐藻总多糖变化趋势 | 第15页 |
| ·盐藻胞外多糖变化趋势 | 第15-16页 |
| ·盐藻胞内多糖变化趋势 | 第16-17页 |
| 3.讨论 | 第17-19页 |
| ·苯酚-硫酸法测定多糖浓度的原理及注意要点 | 第17页 |
| ·高盐胁迫与盐藻多糖之间的关系 | 第17-19页 |
| 第二章 盐藻尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶(DSUGD)基因序列分析 | 第19-32页 |
| 1 分析方法 | 第19-21页 |
| ·核苷酸序列分析 | 第19-20页 |
| ·起始ATG的预测 | 第19页 |
| ·加A信号位点预测 | 第19页 |
| ·序列相似性比对 | 第19页 |
| ·序列ORF(open reading frame finder)读框分析 | 第19-20页 |
| ·蛋白质序列分析 | 第20-21页 |
| ·蛋白质性质分析 | 第20页 |
| ·DsUGD保守区段的分析 | 第20页 |
| ·蛋白质序列跨膜结构分析及信号肽预测 | 第20页 |
| ·高级结构(二级和三级结构)预测 | 第20页 |
| ·蛋白家族分析 | 第20页 |
| ·系统发育分析 | 第20-21页 |
| 2 结果 | 第21-30页 |
| ·核酸序列分析 | 第21-25页 |
| ·起始ATG的预测 | 第21页 |
| ·加A信号位点预测 | 第21-22页 |
| ·序列相似性比对 | 第22-24页 |
| ·序列开放阅读框(ORF)分析 | 第24-25页 |
| ·蛋白质序列分析 | 第25-30页 |
| ·蛋白质性质分析 | 第25页 |
| ·DsUGD Conserved domain(CD)的分析 | 第25页 |
| ·蛋白质序列跨膜结构及信号肽的预测 | 第25-26页 |
| ·高级结构预测 | 第26-28页 |
| ·蛋白家族分析 | 第28-29页 |
| ·进化树的构建 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-32页 |
| ·生物信息学分析的方法 | 第30页 |
| ·DsUGD的结构和功能预测 | 第30-32页 |
| 第三章 DSUGD原核表达及蛋白纯化 | 第32-57页 |
| 1.材料和方法 | 第32-47页 |
| ·材料 | 第32-37页 |
| ·菌种、藻种 | 第32页 |
| ·载体 | 第32页 |
| ·酶制剂 | 第32页 |
| ·试剂盒 | 第32-33页 |
| ·培养基： | 第33页 |
| ·试剂 | 第33-37页 |
| ·实验仪器设备 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-44页 |
| ·盐藻的培养 | 第37页 |
| ·盐藻总RNA的提取 | 第37-38页 |
| ·盐藻cDNA的制备 | 第38页 |
| ·盐藻DsUGD基因的克隆 | 第38-39页 |
| ·DsUGD测序验证 | 第39-40页 |
| ·DsUGD大肠杆菌表达载体的构建 | 第40-41页 |
| ·重组质粒的转化 | 第41-42页 |
| ·阳性克隆转化子的筛选及验证 | 第42-44页 |
| ·重组蛋白的表达 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第44页 |
| ·融合蛋白可溶性的鉴定 | 第44-45页 |
| ·融合蛋白的大量表达 | 第45页 |
| ·SDS—PAGE蛋白质凝胶电泳 | 第45-46页 |
| ·制胶 | 第45页 |
| ·样品处理及电泳 | 第45-46页 |
| ·洗涤包涵体及蛋白纯化 | 第46-47页 |
| 2.结果和分析 | 第47-52页 |
| ·盐藻总RNA的提取 | 第47页 |
| ·原核表达工程菌的构建 | 第47-49页 |
| ·DsUGD基因的克隆 | 第47-48页 |
| ·DsUGD表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·DsUGD在大肠杆菌中的表达 | 第49-51页 |
| ·融合蛋白的诱导表达 | 第49-50页 |
| ·融合蛋白可溶性的鉴定 | 第50-51页 |
| ·包涵体的制备及纯化 | 第51-52页 |
| 3.讨论 | 第52-57页 |
| ·RNA提取中RNase污染的排除 | 第52页 |
| ·高保真酶使用注意事项 | 第52-53页 |
| ·重组质粒的构建 | 第53页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳 | 第53-55页 |
| ·SDS-PAGE原理 | 第53-54页 |
| ·SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳中的常见问题及解决办法： | 第54-55页 |
| ·表达条件的优化 | 第55-56页 |
| ·表达载体的选择 | 第55页 |
| ·诱导条件的优化 | 第55-56页 |
| ·融合蛋白纯化 | 第56-57页 |
| 第四章 DSUGD抗体制备及其在盐胁迫下的表达差异分析 | 第57-67页 |
| 1.材料和方法 | 第57-63页 |
| ·材料 | 第57-59页 |
| ·动物 | 第57页 |
| ·藻种 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57页 |
| ·试剂 | 第57-59页 |
| ·实验仪器设备 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-63页 |
| ·多克隆抗体的制备 | 第59-61页 |
| ·盐藻的胁迫培养 | 第61页 |
| ·盐藻细胞总蛋白的提取 | 第61-62页 |
| ·盐藻蛋白质含量测定 | 第62页 |
| ·Western杂交 | 第62-63页 |
| 2.结果和分析 | 第63-64页 |
| ·抗体效价的检测 | 第63页 |
| ·BSA标准曲线的建立 | 第63页 |
| ·盐藻总蛋白含量的测定 | 第63页 |
| ·SDS—PAGE蛋白质凝胶电泳 | 第63-64页 |
| ·Western杂交结果 | 第64页 |
| ·重组蛋白的Western杂交 | 第64页 |
| ·高盐处理后盐藻藻体蛋白在表达水平差异 | 第64页 |
| 3.讨论 | 第64-67页 |
| ·上样量的一致性 | 第64-65页 |
| ·盐胁迫对DsUGD表达的影响 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-71页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第71-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 综述 | 第74-96页 |
