| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-35页 |
| 一.禽流感病毒 | 第11-18页 |
| ·禽流感病毒的形态特征及其化学组成 | 第11-12页 |
| ·禽流感病毒基因组和主要蛋白的功能 | 第12-13页 |
| ·HA蛋白的结构和功能 | 第13-15页 |
| ·禽流感病毒的流行与危害 | 第15-17页 |
| ·禽流感的防治 | 第17-18页 |
| 二.治疗性单克隆抗体 | 第18-20页 |
| ·治疗性单克隆抗体的历史 | 第18页 |
| ·单克隆抗体的结构和作用机理 | 第18-19页 |
| ·单克隆抗体的分类 | 第19页 |
| ·H5亚型禽流感病毒的广谱治疗性抗体 | 第19-20页 |
| 三.蛋白质结晶学 | 第20-28页 |
| ·蛋白质晶体学发展历史 | 第20页 |
| ·蛋白质的结晶原理和方法 | 第20-22页 |
| ·影响蛋白质晶体生长的因素 | 第22-27页 |
| ·蛋白质结晶条件的筛选和优化 | 第27-28页 |
| 四.蛋白质结构预测 | 第28-34页 |
| ·蛋白结构预测方法的迫切需要及其诞生 | 第28页 |
| ·理论计算方法在蛋白质空间结构模建中的应用 | 第28-30页 |
| ·基于蛋白质结构认识的结构预测 | 第30-32页 |
| ·蛋白结构预测在抗体模拟上的应用 | 第32-34页 |
| 五.本论文的研究目的,思路及意义 | 第34-35页 |
| ·研究的目的和思路 | 第34页 |
| ·研究的意义 | 第34-35页 |
| 第二章 材料与方法 | 第35-52页 |
| 一.仪器 | 第35-36页 |
| 二.材料 | 第36-38页 |
| ·腹水与单抗 | 第36页 |
| ·基因序列及其蛋白晶体结构 | 第36-37页 |
| ·其他试剂 | 第37页 |
| ·常用溶液配制 | 第37-38页 |
| 三.方法 | 第38-52页 |
| ·利用切向流装置改变缓冲液体系 | 第38页 |
| ·饱和硫酸胺沉淀 | 第38页 |
| ·SDS-聚丙烯胺凝胶电泳(SDS—PAGE) | 第38-39页 |
| ·AKTA色谱纯化 | 第39页 |
| ·抗体Fab片段制备及纯化 | 第39-40页 |
| ·分子筛层析分析 | 第40页 |
| ·毛细管电泳分析 | 第40页 |
| ·抗体原液的检定规程 | 第40-45页 |
| ·蛋白质晶体培养 | 第45-48页 |
| ·抗体模拟 | 第48-50页 |
| ·模型合理性验证 | 第50-51页 |
| ·抗体和HA抗原的分子对接 | 第51页 |
| ·复合物溶剂可及表面分析和表位确定 | 第51页 |
| ·与HA抗原保守表位区域结合的抗体多肽 | 第51-52页 |
| 第三章 结果与分析 | 第52-104页 |
| 第一部分 13D4全抗体的纯化工艺的建立及其F(ab)'2片段制备与纯化的摸索 | 第52-79页 |
| 一.13D4全抗体的纯化工艺的建立 | 第52-73页 |
| ·13D4单抗初级分离纯化条件的摸索 | 第52-54页 |
| ·13D4单抗精制分离纯化条件的摸索 | 第54-69页 |
| ·13D4单抗原液检定小结 | 第69-73页 |
| 二.13D4单抗F(ab)'2片段制备与纯化 | 第73-78页 |
| ·13D4单抗F(ab)'2片段制备 | 第73-76页 |
| ·13D4单抗F(ab)'2片段纯化 | 第76-78页 |
| 三.第一部分小结 | 第78-79页 |
| 第二部分 13D4单抗Fab片段的结晶 | 第79-91页 |
| 一.样品的准备 | 第79页 |
| 二.13D4单抗Fab片段的结晶条件的初筛 | 第79-80页 |
| 三.13D4抗体Fab片段的结晶条件的优化 | 第80-90页 |
| ·基于30%(w/v)PEG 1500条件的优化 | 第80-83页 |
| ·基于20%(w/v)PEG 3350,0.2 mol/L KAc条件的优化 | 第83-88页 |
| ·对最优条件的油滴法优化 | 第88页 |
| ·晶体大小的测量与验证 | 第88-90页 |
| 四.第二部分小结 | 第90-91页 |
| 第三部分 抗体13D4 Fab片段结构模拟及其结合位点预测 | 第91-104页 |
| 一.抗体13D4 Fab以及YU22 HA1的同源模建 | 第91-94页 |
| ·模板的选取 | 第91-92页 |
| ·13D4 Fab以及YU22 HA1的分子模建 | 第92-94页 |
| 二.结构评测 | 第94-98页 |
| ·能量分析 | 第94页 |
| ·SAS值分析 | 第94页 |
| ·氢键分析 | 第94-96页 |
| ·二面角分析 | 第96-97页 |
| ·Profiles-3D分析 | 第97-98页 |
| 三.分子对接及其表位分析 | 第98-101页 |
| ·抗体13D4Fab和HA抗原分子对接模式 | 第98页 |
| ·HA蛋白抗体13D4Fab表位的分析 | 第98-101页 |
| 四.抗H5禽流感病毒药物的初步探索 | 第101-103页 |
| ·抗H5禽流感多肽药物设计的基础 | 第101-102页 |
| ·抗体13D4Fab中与HA中和表位区域结合的多肽 | 第102-103页 |
| 五.第三部分小结 | 第103-104页 |
| 第四章 讨论 | 第104-110页 |
| 第五章 小结与展望 | 第110-111页 |
| 一.小结 | 第110页 |
| 二.展望 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 硕士期间发表文章 | 第119页 |
