| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-17页 |
| ·JEV病毒粒子结构 | 第9页 |
| ·JEV的基因组结构及编码的蛋白质 | 第9-12页 |
| ·JEV的基因组结构 | 第9-10页 |
| ·病毒结构基因编码蛋白 | 第10-12页 |
| ·乙脑疫苗的研究进展及展望 | 第12-17页 |
| ·灭活疫苗 | 第12页 |
| ·减毒活疫苗 | 第12-13页 |
| ·发展中的乙脑基因工程疫苗的现状 | 第13页 |
| ·亚单位疫苗(组分疫苗) | 第13页 |
| ·重组活疫苗 | 第13-14页 |
| ·核酸疫苗 | 第14-17页 |
| 2 实验材料 | 第17-22页 |
| ·毒株、细胞与试验动物 | 第17页 |
| ·菌种与质粒载体 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-21页 |
| ·细胞培养所需主要试剂 | 第17页 |
| ·RT-PCR所需主要试剂 | 第17-18页 |
| ·目的基因的克隆及其表达所需主要试剂 | 第18页 |
| ·十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)所需主要试剂 | 第18页 |
| ·Western-blotting的所需的主要试剂 | 第18-19页 |
| ·主要试剂的配制方法 | 第19-20页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21-22页 |
| 3 方法 | 第22-33页 |
| ·技术路线 | 第22页 |
| ·JEV SA14-14-2株的增殖、TCID_(50)的测定及高免血清的制备 | 第22-24页 |
| ·鼠脑增殖病毒 | 第22-23页 |
| ·细胞培养法 | 第23页 |
| ·JEV TCID50的测定 | 第23页 |
| ·JEV病毒SA14-14-2株高免血清的制备 | 第23-24页 |
| ·JEV基因组RNA的提取及RT-PCR扩增反应 | 第24-25页 |
| ·Trizol法提取病毒的RNA | 第24页 |
| ·引物的设计与合成 | 第24页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第24-25页 |
| ·RT-PCR产物的纯化 | 第25页 |
| ·pUC19克隆载体和JEV目的片段prM-E的连接与转化 | 第25-26页 |
| ·pUC19克隆载体和JEV目的片段prM-E的酶切及连接 | 第25-26页 |
| ·转化细菌 | 第26页 |
| ·质粒的提取 | 第26-27页 |
| ·质粒的小量制备 | 第26-27页 |
| ·质粒的大量制备 | 第27页 |
| ·重组克隆载体的双酶切鉴定 | 第27页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·小量制备表达载体PET32a(+)质粒 | 第27-28页 |
| ·重组表达质粒PET-prME的构建 | 第28页 |
| ·序列测定与序列分析 | 第28页 |
| ·诱导目的蛋白表达 | 第28-29页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE分析及Western-blotting检测表达产物 | 第29-31页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第29-30页 |
| ·Western-blotting检测表达产物 | 第30-31页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第31页 |
| ·小量制备表达载体pcDNA3.1(+)质粒 | 第31页 |
| ·重组表达质粒pcDNA-prME、pcDNA-E的构建 | 第31页 |
| ·pcDNA-prME,pcDNA-E重组质粒的DNA免疫及抗体的中和试验检测 | 第31-33页 |
| ·Balb/c鼠的DNA免疫 | 第31-32页 |
| ·抗体的中和效价测定(固定病毒稀释血清的方法) | 第32-33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-42页 |
| ·鼠脑增殖病毒及细胞增毒结果 | 第33页 |
| ·鼠脑增殖病毒结果 | 第33页 |
| ·细胞增毒结果 | 第33页 |
| ·细胞毒TCID_(50)的测定结果 | 第33-34页 |
| ·JEV病毒SA14-14-2株高免血清的检测 | 第34-35页 |
| ·prM-E、E基因的PCR扩增结果 | 第35-36页 |
| ·重组克隆质粒PUC-prME的双酶切鉴定 | 第36页 |
| ·重组表达质粒(PET-prME、pcDNA-PRME、pcDNA-E)的双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·测序结果 | 第37-39页 |
| ·诱导prM-E基因的表达 | 第39-40页 |
| ·Western-blotting检测表达的目的蛋白 | 第40页 |
| ·中和试验检测DNA免疫的抗体结果 | 第40-42页 |
| 5 讨论 | 第42-46页 |
| 6 结论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第53-54页 |
| 作者简历 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56-58页 |
