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玉米大斑病菌黑色素生物合成相关基因的克隆与功能分析

摘要第1-5页
Abstract第5-9页
1 引言第9-11页
2 材料和方法第11-22页
   ·菌种与玉米品种第11页
   ·供试培养基第11页
   ·供试药品及主要试剂第11页
   ·主要仪器第11-12页
   ·玉米大斑病菌小柱孢酮脱水酶基因SCD的克隆第12-15页
     ·引物设计第12页
     ·病菌基因组DNA及总RNA提取第12-13页
     ·cDNA第一链的合成第13页
     ·病菌SCD和PKS基因组DNA和cDNA同源片段的获得第13页
     ·DNA片段的纯化第13-14页
     ·PCR产物与pMD18-T载体的连接第14页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第14页
     ·连接产物转化感受态细胞第14-15页
     ·碱裂解法小量提取质粒第15页
   ·基因全长的获得第15-19页
     ·5’RACE扩增第15-17页
     ·3’RACE扩增第17-18页
     ·Genome Walking技术获得PKS基因下游DNA序列第18-19页
     ·基因的拼结和全长cDNA的获得第19页
     ·基因的功能分析第19页
   ·基因DNA全长的获得和基因结构分析第19页
   ·基因的拷贝数分析第19-21页
   ·小柱孢酮脱水酶基因SCD的抑制剂分析第21-22页
     ·Carpropamid对玉米大斑病菌分生孢子萌发的影响第21页
     ·Carpropamid对玉米大斑病菌附着胞形成的影响第21-22页
3 结果与分析第22-42页
   ·基因组DNA和总RNA的提取及cDNA的合成第22页
   ·SCD和PKS基因同源片段的获得第22-25页
     ·基因简并引物的设计第22-23页
     ·PCR产物的纯化、克隆、测序第23-25页
   ·SCD和PKS基因全序列的获得第25-30页
     ·RACE技术获得SCD的cDNA全长第25-26页
     ·SMART RACE和Genome Walking技术获得PKS基因序列第26-30页
   ·玉米大斑病菌SCD基因DNA全长和基因的结构分析第30-32页
   ·基因的相似性及基因可能功能分析第32-40页
     ·SCD基因的相似性及基因可能功能分析第32-36页
     ·PKS基因的相似性及基因可能功能分析第36-40页
   ·SOUTHERN杂交第40-41页
     ·探针的制备第40页
     ·Southern杂交第40-41页
   ·玉米大斑病菌小柱孢酮脱水酶基因SCD的抑制剂分析第41-42页
     ·Carpropamid对分生孢子萌发的影响第41页
     ·Carpropamid对附着孢形成的影响第41-42页
4 讨论第42-46页
   ·利用蛋白质的保守性氨基酸序列进行同源基因克隆第42页
   ·RACE技术获得基因cDNA全长第42-43页
   ·GENOME WALKING技术获得已知基因片段的侧翼序列第43页
   ·PKS的结构域及可能功能第43-44页
   ·SCD基因的结构及可能功能第44-46页
5 结论第46-47页
参考文献第47-53页
在读期间发表的学术论文第53-54页
作者简历第54-55页
致谢第55页

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