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人肝细胞再生因子表达载体构建及抗肝纤维化作用

提要第1-9页
英文缩略词表第9-11页
第一篇 前言第11-36页
 第一章 人肝细胞再生因子基因研究进展第11-19页
 第二章 HGF 的生物学功能及其应用第19-26页
 第三章 肝纤维化机制及基因治疗研究进展第26-34页
 第四章 论文的提出及意义第34-36页
第二篇 实验研究第36-96页
 第一章 人肝细胞再生因子真核表达载体的构建及C057 细胞中表达第36-57页
  第一节 实验材料和实验方法第36-46页
   一、实验材料第36-40页
   二、实验方法第40-46页
    (一) 人HGFcDNA 的真核表达载体(PCT-neo-HGF)的构建及阳性克降筛选第40-43页
    (二) PCI-neo-HGF 转染C057 细胞第43-45页
    (三) 重组人HGF 表达产物检测采用ELISA 法进行检测第45-46页
  第二节 结果第46-54页
   一、人肝细胞再生因子真核表达载体的构建第46-53页
   二、PCI-HGF 在C057 细胞中的表达第53-54页
  第三节 讨论第54-57页
 第二章 人肝细胞再生因子基因(PCI-neo-HGF)的生物学效应及机制体外初步的研究第57-78页
  第一节 实验材料和实验方法第57-69页
   一、实验材料第57-61页
   二、实验方法第61-69页
    (一) 细胞的培养第61-62页
    (二) PCI-neo-HGF 基因转染和克隆筛选第62-64页
    (三) 转染后细胞鉴定-HGF 蛋白表达检测第64-67页
    (四) 转染PCI-neo-HGF 对正常肝细胞的生物学效应第67-68页
    (五) 转染PCI-neo-HGF/HL-7702 细胞、转染 PCI-new-HGF/CFSC-2G 细胞caspase-3、-8、-9 的测定第68-69页
  第二节 结果第69-74页
   (一) PCI-neo-HGF 基因转染HL-7702 细胞和克隆筛选结果第69页
   (二) 转染后细胞鉴定第69-70页
   (三) 细胞形态学观察第70-71页
   (四) 转染PCI-new-HGF 的HL-7702 细胞增殖活性测定结果第71-74页
   (五) 转染PCI-neo-HGF /HL-7702细胞、转染PCI-new-HGF /CFSC-2G细胞caspase-3、-8、-9 蛋白表达的变化第74页
  第三节 讨论第74-78页
 第三章 PCI-neo--HGF 对实验性大鼠肝纤维化的基因治疗第78-96页
  第一节 实验材料和实验方法第78-82页
   一、实验材料第78-79页
   二、实验方法第79-81页
    (一) 大鼠纤维化模型的建立第79-80页
    (二) 肝纤维化大鼠HGF 表达情况第80-81页
    (三) 透明酯酸、层粘蛋白、Ⅲ、Ⅳ型胶原的检测第81页
    (四) 肝功能测定采用日立7170A 全自动生化分析仪测定第81页
    (五) 石蜡切片HE 及Masson 染色观察病理形态第81页
   三、观察指标第81-82页
  第二节 结果第82-93页
   一、大鼠一般情况第82页
   二、各组大鼠肝组织中HGF 表达情况第82-84页
   三、血清HGF 表达情况第84-85页
   四、PCI-neo-HGF 对大鼠肝功能的影响第85页
   五、PCI-neo-HGF 对大鼠肝纤维化指标的影响第85页
   六、病理形态学观察结果第85-93页
  第三节 讨论第93-96页
结论第96-97页
本研究创新点及意义第97-98页
参考文献第98-112页
攻读期间发表论文第112-113页
中文摘要第113-116页
英文摘要第116-120页
致谢第120页

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