| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 1 绪论 | 第13-19页 |
| ·血吸虫DNA 疫苗的研究意义 | 第13-14页 |
| ·血吸虫DNA 疫苗的国内外研究概况 | 第14-18页 |
| ·研究目标和内容 | 第18-19页 |
| 2 日本血吸虫抗原基因的融合基因的构建 | 第19-33页 |
| ·引言 | 第19页 |
| ·材料与方法 | 第19-28页 |
| ·实验试剂药品 | 第19-21页 |
| ·日本血吸虫成虫 | 第21页 |
| ·超效感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
| ·引物设计 | 第22-23页 |
| ·成虫总RNA 的提取 | 第23页 |
| ·日本血吸虫抗原基因的制备 | 第23-26页 |
| ·融合抗原基因的扩增 | 第26-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-31页 |
| ·电泳图片 | 第28-30页 |
| ·测序结果 | 第30-31页 |
| ·小结 | 第31-33页 |
| 3 日本血吸虫DNA 疫苗的构建 | 第33-53页 |
| ·引言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-41页 |
| ·实验试剂药品 | 第33-35页 |
| ·日本血吸虫抗原基因的克隆载体 | 第35页 |
| ·日本血吸虫抗原基因的融和基因的克隆载体 | 第35页 |
| ·真核表达载体 pVIVO2 | 第35页 |
| ·超效感受态细胞 | 第35-36页 |
| ·真核表达载体和插入片段的线性化 | 第36页 |
| ·单价真核表达重组载体的构建和克隆 | 第36-38页 |
| ·二价真核表达重组载体的构建和克隆 | 第38-39页 |
| ·三价真核表达重组载体的构建和克隆 | 第39-40页 |
| ·四价真核表达重组载体的构建和克隆 | 第40-41页 |
| ·结果与分析 | 第41-50页 |
| ·已构建的日本血吸虫DNA 疫苗 | 第41页 |
| ·日本血吸虫DNA 疫苗酶切验证电泳谱图 | 第41-50页 |
| ·小结 | 第50-53页 |
| 4 日本血吸虫DNA 疫苗发酵条件的优化 | 第53-69页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·材料与方法 | 第53-59页 |
| ·菌种 | 第53页 |
| ·培养基和试剂 | 第53-54页 |
| ·超效感受态细胞 | 第54页 |
| ·培养方法 | 第54-55页 |
| ·提取与检测方法 | 第55页 |
| ·发酵种子宿主菌的选择 | 第55-56页 |
| ·发酵种子宿主菌的传代稳定性测定 | 第56页 |
| ·传代后提取质粒酶切验证 | 第56页 |
| ·培养基碳源筛选 | 第56页 |
| ·培养基氮源筛选 | 第56页 |
| ·培养基磷酸盐成分的优化 | 第56页 |
| ·“Plackeet-Burman”二水平正交设计筛选培养基重要因素 | 第56-58页 |
| ·“Box-Behnken”的中心组合设计响应面分析 | 第58页 |
| ·最优培养条件下的发酵产量的验证 | 第58-59页 |
| ·优化前后的比较 | 第59页 |
| ·结果与分析 | 第59-66页 |
| ·发酵种子宿主菌的DCW 生物量生长曲线 | 第59页 |
| ·发酵种子宿主菌的PDY 生长曲线 | 第59-60页 |
| ·种子传代质粒稳定性检测 | 第60页 |
| ·传代后提取质粒酶切验证 | 第60-61页 |
| ·碳源优化结果 | 第61-62页 |
| ·氮源优化结果 | 第62页 |
| ·磷酸盐优化结果 | 第62-63页 |
| ·“Plackeet-Burman”二水平正交设计各因素主效应 | 第63页 |
| ·“Box-Behnken”的中心组合设计响应面分析 | 第63-66页 |
| ·小结 | 第66-69页 |
| 5 日本血吸虫DNA 疫苗的分离纯化 | 第69-84页 |
| ·前言 | 第69页 |
| ·材料与方法 | 第69-74页 |
| ·菌种 | 第69页 |
| ·试剂 | 第69-70页 |
| ·生化分离介质 | 第70页 |
| ·质粒粗产物的制备 | 第70-71页 |
| ·样品预处理 | 第71页 |
| ·粗样品去除RNA 和杂蛋白 | 第71-72页 |
| ·纯化超螺旋DNA | 第72页 |
| ·去除内毒素 | 第72-73页 |
| ·除盐 | 第73页 |
| ·产物浓缩 | 第73页 |
| ·产品质量评价 | 第73-74页 |
| ·结果与分析 | 第74-80页 |
| ·去除RNA 和杂蛋白 | 第74-75页 |
| ·纯化超螺旋DNA | 第75-78页 |
| ·产品质量评价 | 第78-80页 |
| ·小结 | 第80-84页 |
| 6 日本血吸虫DNA 疫苗的真核表达 | 第84-91页 |
| ·前言 | 第84页 |
| ·材料与方法 | 第84-87页 |
| ·空白质粒 | 第84页 |
| ·日本血吸虫DNA 疫苗实验分组 | 第84-85页 |
| ·实验小鼠 | 第85页 |
| ·真核细胞 | 第85页 |
| ·一抗阳性血清 | 第85页 |
| ·荧光二抗 | 第85页 |
| ·日本血吸虫DNA 疫苗的体外表达 | 第85页 |
| ·日本血吸虫DNA 疫苗的体内表达 | 第85-87页 |
| ·结果与分析 | 第87-89页 |
| ·日本血吸虫DNA 疫苗的体外表达 | 第87-88页 |
| ·日本血吸虫DNA 疫苗的体内表达 | 第88-89页 |
| ·小结 | 第89-91页 |
| 7 结论与展望 | 第91-96页 |
| ·结论 | 第91-94页 |
| ·展望 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-105页 |
| 附录I 攻读硕士学位期间发表的专利与论文 | 第105-106页 |
| 附录II 日本血吸虫抗原基因和融合基因的测序结果 | 第106-117页 |
