| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 前言 | 第8-17页 |
| 一、弩巴贝斯虫病原学研究进展 | 第8-10页 |
| 二、弩巴贝斯虫病流行病学及危害 | 第10-12页 |
| 三、鸳巴贝斯虫主要抗原及弩巴贝斯虫病防治研究进展 | 第12-15页 |
| 四、本研究目的及意义 | 第15-17页 |
| 试验研究 | 第17-52页 |
| 1 试验材料 | 第17-25页 |
| ·病料 | 第17页 |
| ·载体与菌株 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17页 |
| ·试验所用溶液及其配制 | 第17-24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2 试验方法 | 第25-35页 |
| ·驽巴贝斯虫基因组DNA的制备 | 第25页 |
| ·引物的设计与合成 | 第25页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·PCR产物的回收 | 第26页 |
| ·感受态细胞的制备(CaCl_2法) | 第26页 |
| ·BC-48 DNA与pGEM-T Easy载体的重组连接 | 第26页 |
| ·重组连接后质粒DNA的转化 | 第26-27页 |
| ·重组克隆的筛选 | 第27页 |
| ·质粒DNA的小量制备(碱性裂解法) | 第27-28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28页 |
| ·序列测定及分析 | 第28页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·重组表达载体的鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组融合表达质粒的诱导表达 | 第30页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第30-31页 |
| ·融合蛋白Western-blotting分析 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第32页 |
| ·包涵体的鉴定 | 第32页 |
| ·亲和层析法纯化融合蛋白(Batch法) | 第32-33页 |
| ·BC-48融合蛋白的初步应用——ELISA试验 | 第33-35页 |
| 3 试验结果 | 第35-45页 |
| ·PCR扩增 | 第35页 |
| ·目的基因的克隆及重组质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| ·BC48-easy重组质粒的序列测定及同源性分析 | 第36-38页 |
| ·重组表达载体的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组表达质粒的序列测定及分析 | 第39-40页 |
| ·重组表达载体pGEX-BC48的表达 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白Western-blotting分析 | 第41页 |
| ·蛋白存在形式的鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组蛋白的亲和层析纯化 | 第42页 |
| ·以重组BC-48蛋白为抗原的ELISA试验 | 第42-45页 |
| 4 讨论 | 第45-51页 |
| ·驽巴贝斯虫病的诊断 | 第45页 |
| ·BC-48基因片断的克隆与扩增 | 第45-46页 |
| ·酶切鉴定 | 第46页 |
| ·影响外源基因在大肠杆菌中高效表达的因素 | 第46-47页 |
| ·高效融合表达载体pGEX-4T-2的选择 | 第47-48页 |
| ·BC-48重组融合蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第48页 |
| ·Western—blotting检测重组蛋白的特异性 | 第48-50页 |
| ·以重组BC-48蛋白为抗原的ELISA试验 | 第50-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61-62页 |
| 附录(攻读学位期间发表论文目录) | 第62-63页 |
