| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-23页 |
| 第一章 TLRs与哮喘炎症细胞和食品营养关系研究 | 第23-43页 |
| ·引言 | 第23-24页 |
| ·支气管哮喘免疫学 | 第24-25页 |
| ·TLR的生物学 | 第25-27页 |
| ·TLRs及T淋巴细胞与支气管哮喘 | 第27-28页 |
| ·TLR在Th1型免疫应答中的作用 | 第27-28页 |
| ·TLRs在Th2型免疫应答中的作用 | 第28页 |
| ·TLRs及肥大细胞与支气管哮喘 | 第28-29页 |
| ·TLRs及肺上皮细胞与支气管哮喘 | 第29-30页 |
| ·支气管上皮细胞与哮喘 | 第29页 |
| ·Ⅱ型上皮细胞与哮喘 | 第29-30页 |
| ·TLR s和Ⅱ型上皮细胞在哮喘中的作用 | 第30页 |
| ·TLRs及DC与支气管哮喘 | 第30-31页 |
| ·DC和TLRs干预治疗支气管哮喘展望 | 第31-32页 |
| ·TLRs与食品营养关系 | 第32-35页 |
| ·益生菌及作用机制 | 第32-34页 |
| ·TLR、食品与健康 | 第34-35页 |
| 参考文献 | 第35-43页 |
| 第二章 小鼠TLR4基因克隆和鉴定 | 第43-55页 |
| ·引言 | 第43-44页 |
| ·实验材料和仪器 | 第44页 |
| ·料和试剂 | 第44页 |
| ·主要实验仪器 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-48页 |
| ·引物设计与合成 | 第44-46页 |
| ·小鼠脾组织细胞总RNA的提取 | 第46页 |
| ·RT-PCR | 第46-47页 |
| ·PCR产物的DNA重组和克隆 | 第47页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第47页 |
| ·鉴定与分析 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-51页 |
| ·RT PCR扩增TLR4基因 | 第48页 |
| ·重组质粒pcDNA3.1(+)TLR4的酶切及PCR鉴定 | 第48-49页 |
| ·小鼠TLR4基因的序列分析 | 第49-51页 |
| ·分析讨论 | 第51-52页 |
| ·小鼠TLR4基因的表达蛋白 | 第51页 |
| ·小鼠TLR4基因 | 第51-52页 |
| ·小鼠TLR4基因克隆及其对支气管哮喘的意义 | 第52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 第三章 小鼠TLR4基因腺病毒载体的构建 | 第55-81页 |
| ·引言 | 第55-56页 |
| ·实验材料和仪器 | 第56-57页 |
| ·材料和试剂 | 第56-57页 |
| ·实验仪器 | 第57页 |
| ·实验方法 | 第57-61页 |
| ·含目标基因的穿梭质粒的构建 | 第57-58页 |
| ·阳性克隆的筛选与鉴定 | 第58页 |
| ·构建后质粒鉴定 | 第58-59页 |
| ·重组腺病毒在293细胞中的包装 | 第59页 |
| ·Ad5F35-mTLR4鉴定 | 第59页 |
| ·病毒活性确定 | 第59-61页 |
| ·结果 | 第61-69页 |
| ·穿梭质粒连接产物鉴定 | 第61页 |
| ·含pDC316-mTLR4菌液的PCR鉴定 | 第61-62页 |
| ·pDC316-mTLR4质粒的酶切鉴定 | 第62-63页 |
| ·pDC316-mTLR4测序鉴定 | 第63-67页 |
| ·293细胞中Ad V-TLR4病毒包装 | 第67-68页 |
| ·Ad5F35-mTLR4的PCR鉴定 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-78页 |
| ·病毒载体 | 第69-71页 |
| ·病毒载体的包装系统 | 第71-72页 |
| ·病毒载体的纯化 | 第72-73页 |
| ·腺病毒及其腺病毒载体 | 第73-74页 |
| ·常用腺病毒载体的包装方法 | 第74-75页 |
| ·腺病毒载体Ad5/F35 | 第75-77页 |
| ·Ad5F35-mTLR4 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-81页 |
| 第四章 TLR4腺病毒载体转染在DC的表达观察 | 第81-97页 |
| ·引言 | 第81-83页 |
| ·实验材料和仪器 | 第83-84页 |
| ·材料和试剂 | 第83页 |
| ·实验仪器 | 第83-84页 |
| ·实验方法 | 第84-86页 |
| ·DC的倒置显微镜和电镜观察 | 第84页 |
| ·病毒载体侵染DC细胞Ad5F35-mTLR4感染DC细胞: | 第84页 |
| ·适当MOI值确定 | 第84-85页 |
| ·TLR4mRNA定性表达检测 | 第85-86页 |
| ·TLR4mRNA定量表达检测 | 第86页 |
| ·TLR4蛋白表达检测 | 第86页 |
| ·结果 | 第86-91页 |
| ·DC形态学观察 | 第86-87页 |
| ·MOI值确定 | 第87-89页 |
| ·Ad5F35-mTLR4感染DC表达检测 | 第89-91页 |
| ·讨论 | 第91-94页 |
| ·DC疫苗 | 第91-92页 |
| ·DC疫苗目前的应用 | 第92-93页 |
| ·ad-TLR4-DC | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-97页 |
| 第五章 TLR4腺病毒载体转染对DC表面标志和细胞因子表达的体外实验观察 | 第97-119页 |
| ·引言 | 第97-98页 |
| ·DC与支气管哮喘 | 第97页 |
| ·支气管哮喘与细胞因子紊乱 | 第97-98页 |
| ·体外实验观察的意义 | 第98页 |
| ·实验材料和仪器 | 第98-99页 |
| ·材料和试剂 | 第98页 |
| ·实验仪器 | 第98-99页 |
| ·实验方法 | 第99-102页 |
| ·DC培养和分组 | 第99页 |
| ·DC表面标志检测 | 第99页 |
| ·培养DC上清IL-12、IL-4和IFN-γ表达检测 | 第99-101页 |
| ·培养DCIL-12mRNA、IL-4mRNA和IFN-γmRNA表达检测 | 第101-102页 |
| ·统计学分析 | 第102页 |
| ·结果 | 第102-106页 |
| ·Ad5F35-mTLR4转染对DC表面标志的影响 | 第102-103页 |
| ·Ad5F35-mTLR4转染对DCIL-12、IL-4和IFN-γ表达的影响 | 第103页 |
| ·Ad5F35-mTLR4转染DC对IL-12mRNA、IL-4mRNA和IFN-γmRNA的影响 | 第103-104页 |
| ·LPS对不同DC组表面标志的影响 | 第104-105页 |
| ·LPS对不同DC组IL-12、IL-4和IFN-γ的影响 | 第105页 |
| ·LPS对不同DC组IL-12mRNA、IL-4mRNA和IFN-γmRNA表达的影响 | 第105-106页 |
| ·分析讨论 | 第106-113页 |
| ·TLR信号传导系统 | 第106-107页 |
| ·Ia、CD40、CD80和CD86 | 第107-109页 |
| ·ID-12 IL-4和IFN-γ | 第109-112页 |
| ·LPS脂多糖(Lipopolysacchride,LPS) | 第112-113页 |
| ·TLR4对DC表面标志和细胞因子表达的影响 | 第113页 |
| 参考文献 | 第113-119页 |
| 第六章 哮喘及TLR4转染DC体内免疫调节功能观察 | 第119-139页 |
| ·引言 | 第119-123页 |
| ·基因治疗概述 | 第119-120页 |
| ·以腺病毒载体为基础的基因治疗 | 第120-121页 |
| ·以DC为基础的基因治疗 | 第121-122页 |
| ·TLR4基因导入DC的基因疗法 | 第122-123页 |
| ·实验材料和仪器 | 第123页 |
| ·材料和试剂 | 第123页 |
| ·实验仪器 | 第123页 |
| ·实验方法 | 第123-126页 |
| ·小鼠哮喘模型制备 | 第123-124页 |
| ·小鼠肺组织学检测 | 第124页 |
| ·哮喘模型小鼠DC分离培养 | 第124页 |
| ·哮喘模型小鼠DC TLR4mRNA | 第124-125页 |
| ·小鼠DC蛋白的提取及TLR4蛋白的Western Blotting检测 | 第125页 |
| ·哮喘患儿血浆IL-4、IgE测定 | 第125页 |
| ·老年性哮喘患者血浆和支气管灌洗液IL-4相关性分析 | 第125页 |
| ·TLR4转染DC的免疫调节功能观察 | 第125-126页 |
| ·小鼠TLR4DC制备 | 第126页 |
| ·小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)白细胞和Eos检测 | 第126页 |
| ·小鼠脾细胞IL-4、IL-5、IFN-γ和血浆IgE含量测定 | 第126页 |
| ·小鼠脾细胞CD4+CD25+细胞的百分比检测 | 第126页 |
| ·统计学处理 | 第126页 |
| ·结果 | 第126-133页 |
| ·哮喘模型小鼠肺组织学改变 | 第126-127页 |
| ·哮喘模型小鼠脾细胞培养上清细胞因子改变 | 第127-128页 |
| ·哮喘模型小鼠DC TLR4蛋白表达 | 第128页 |
| ·哮喘模型小鼠DC TLRmRNA分析 | 第128页 |
| ·不同人群IL-4、IgE及相关性检测 | 第128-130页 |
| ·TLR4DC对哮喘小鼠肺支气管组织形态的影响 | 第130-131页 |
| ·TLR4DC对哮喘小鼠支气管肺泡灌洗液过敏炎症细胞数的影响 | 第131页 |
| ·TLR4DC对哮喘小鼠脾淋巴细胞IL-4、ID-5、IFN-γ和血清IgE的影响 | 第131-132页 |
| ·TLR4DC对哮喘小鼠脾淋巴细胞活性的影响 | 第132-133页 |
| ·分析讨论 | 第133-136页 |
| ·DC临床应用情况 | 第133页 |
| ·DC在支气管哮喘治疗中的应用 | 第133-134页 |
| ·ad-TLR4DC与支气管哮喘免疫调节 | 第134-136页 |
| 参考文献 | 第136-139页 |
| 第七章 工作总结与展望 | 第139-147页 |
| ·主要结论 | 第139-140页 |
| ·研究创新 | 第140-141页 |
| ·工作展望 | 第141-145页 |
| ·病毒载体的免疫原性和安全性检测 | 第141页 |
| ·安全、高效、靶向和可调控病毒载体的研究和使用 | 第141-143页 |
| ·基因修饰DC的免疫治疗问题 | 第143-144页 |
| ·DC表面TLR研究 | 第144页 |
| ·DC的免疫耐受研究 | 第144页 |
| ·Tc1和Tc2群与DC关系 | 第144-145页 |
| ·临床基因治疗 | 第145页 |
| 参考文献 | 第145-147页 |
| 在读期间发表的第一作者学术论文 | 第147-148页 |
| 致谢 | 第148页 |
