| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-53页 |
| 一、小麦种子蛋白的组成 | 第19-20页 |
| 二、小麦贮藏蛋白的分离分析方法 | 第20-26页 |
| 1.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第21-22页 |
| 2.酸性-聚丙烯酰胺凝胶电泳(A-PAGE) | 第22-23页 |
| 3.反相高效液相色谱(RP-HPLC) | 第23页 |
| 4.高效毛细管电泳(HPCE) | 第23-24页 |
| 5.双向凝胶电泳(2-DE)和生物质谱分析 | 第24-26页 |
| 三、小麦高分子量谷蛋白(HMW-GS) | 第26-34页 |
| 1.HMW-GS的编码位点与遗传多态性 | 第26-28页 |
| 2.HMW-GS的氨基酸序列与结构特征 | 第28-31页 |
| 3.HMW-GS的合成积累规律 | 第31-32页 |
| 4.HMW-GS与小麦品质的关系 | 第32-34页 |
| 四、低分子量谷蛋白亚基(LMW-GS) | 第34-46页 |
| 1.LMW-GS的组成 | 第35-36页 |
| 2.LMW-GS的分类 | 第36-37页 |
| 3.LMW-GS的染色体定位 | 第37-39页 |
| 4.LMW-GS的分子结构 | 第39-40页 |
| 5.LMW-GS的空间结构特征和在形成谷蛋白多聚体中的作用 | 第40-42页 |
| 6.小麦近缘种与其他谷物中的LMW-GS | 第42页 |
| 7.LMW-GS的合成与加工 | 第42-44页 |
| 8.LMW-GS基因的调控机制 | 第44页 |
| 9.LMW-GS对品质的影响 | 第44-46页 |
| 五、分子生物学方法在谷蛋白研究上的应用 | 第46-51页 |
| 1.谷蛋白编码基因的分子克隆 | 第46-48页 |
| 2.谷蛋白亚基的体外表达 | 第48-49页 |
| 3.分子标记技术 | 第49-50页 |
| 4.谷蛋白亚基的转基因研究 | 第50-51页 |
| 六、立题依据和论文设计 | 第51-53页 |
| 1.粗山羊草中HMW-GS的鉴定和x-型编码基因的克隆 | 第52页 |
| 2.粗山羊草与硬粒小麦HMW-GS基因的原核表达 | 第52页 |
| 3.一粒小麦LMW-GS亚基的分离鉴定和基因克隆 | 第52-53页 |
| 第二章 粗山羊草高分子量谷蛋白亚基的分离与鉴定 | 第53-69页 |
| 一、实验材料 | 第53页 |
| 二、实验方法 | 第53-58页 |
| 1.SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第53-54页 |
| 2.等电聚焦双向凝胶电泳(IEF×SDS-PAGE) | 第54-55页 |
| 3.高效毛细管电泳(HPCE) | 第55-56页 |
| 4.反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析 | 第56页 |
| 5.质谱(Mass Spectrometry,MS)分析 | 第56-58页 |
| 三、结果与分析 | 第58-65页 |
| 1.粗山羊草HMW-GS的SDS-PAGE电泳鉴定 | 第58-59页 |
| 2.粗山羊草谷蛋白亚基2-DE(IEF×SDS-PAGE)电泳鉴定 | 第59-61页 |
| 3.粗山羊草HMW-GS高效毛细管电泳(HPCE)鉴定 | 第61-62页 |
| 4.粗山羊草HMW-GS反相高效液相色谱(RP-HPLC)分析 | 第62-64页 |
| 5.粗山羊草HMW-GS质谱(MALDI-TOF-MS)分析 | 第64-65页 |
| 四、讨论 | 第65-69页 |
| 1.粗山羊草HMW-GS的SDS-PAGE和IEF×SDS-PAGE电泳 | 第65-66页 |
| 2.粗山羊草HMW-GS的HPCE和RP-HPLC分析 | 第66-67页 |
| 3.粗山羊草HMW-GS的MS分析 | 第67-69页 |
| 第三章 粗山羊草高分子量谷蛋白亚基编码基因的克隆、序列测定及分子进化分析 | 第69-101页 |
| 一、实验材料 | 第69页 |
| 二、实验方法 | 第69-73页 |
| 1.仪器设备 | 第69页 |
| 2.种子基因组DNA提取 | 第69-70页 |
| 3.PCR扩增 | 第70-71页 |
| 4.PCR产物的克隆 | 第71-73页 |
| 5.序列比较、进化分析和二级结构的预测 | 第73页 |
| 三、结果与分析 | 第73-93页 |
| 1.粗山羊草HMW-GS编码基因的PCR扩增和克隆 | 第73-74页 |
| ·Dx1.6~t、1Dx5.2~t和1Dx3~t基因及蛋白序列分析 | 第74-79页 |
| ·Dx1.6~t、1Dx5.2~t和1Dx3~t与已克隆的x-型和y-型HMW-GS的蛋白序列比较分析 | 第79-84页 |
| 4.半胱氨酸残基的比较 | 第84页 |
| 5.x-型亚基成熟蛋白氨基酸组成比较 | 第84-87页 |
| ·Dx1.6~t、1Dx3~t和1Dx5.2~t亚基编码区中单核苷酸多态性(SNPs)的分析 | 第87-88页 |
| 7.分子进化分析 | 第88-93页 |
| 8.HMW-GS二级结构的预测 | 第93页 |
| 四、讨论 | 第93-101页 |
| ·Dx型HMW-GS的分子克隆 | 第93-96页 |
| 2.HMW-GS的序列结构特征及对品质的影响 | 第96-98页 |
| 3.HMW-GS重复序列变异和氨基酸组成 | 第98页 |
| ·Dx1.6~t、1Dx3~t和1Dx5.2~t中SNPs和HMW-GS分子进化分析 | 第98-99页 |
| 5.HMW-GS二级结构的预测 | 第99-101页 |
| 第四章 高分子量谷蛋白亚基编码基因在大肠杆菌中的体外表达 | 第101-114页 |
| 一、实验材料 | 第101页 |
| 二、实验方法 | 第101-105页 |
| 1.表达载体和菌株 | 第101页 |
| 2.HMW-GS编码基因表达载体的构建 | 第101-104页 |
| 3.HMW-GS编码基因的蛋白表达及提取方法 | 第104页 |
| 4.Western Blotting | 第104-105页 |
| 三、结果与分析 | 第105-110页 |
| 1.HMW-GS编码基因原核表达载体的构建 | 第105-107页 |
| 2.HMW-&GS编码基因原核表达载体的蛋白表达 | 第107-110页 |
| 3.Western Blotting分析 | 第110页 |
| 四、讨论 | 第110-114页 |
| 1.HMW-GS编码基因的E.coli表达 | 第111-112页 |
| 2.HMW-GS编码基因表达条件的优化 | 第112-113页 |
| 3.HMW-GS编码基因表达的展望 | 第113-114页 |
| 第五章 栽培一粒小麦中低分子量谷蛋白亚基编码基因的分子克隆与鉴定 | 第114-140页 |
| 一、实验材料 | 第114页 |
| 二、实验方法 | 第114-117页 |
| 1.LMW-GS的碱性聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第114页 |
| 2.LMW-GS蛋白质转印与N-端微量测序 | 第114-115页 |
| 3.LMW-GS的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析 | 第115-116页 |
| 4.种子基因组DNA提取 | 第116页 |
| 5.PCR扩增 | 第116页 |
| 6.分子克隆与DNA测序 | 第116页 |
| 7.SNPs鉴定、序列比较与进化分析 | 第116-117页 |
| 三、结果与分析 | 第117-133页 |
| 1.栽培一粒小麦中IMW-GS的特征 | 第117-119页 |
| 2.栽培一粒小麦中LMW-GS编码基因的PCR扩增和分子克隆 | 第119-120页 |
| 3.栽培一粒小麦中三个新的LMW-i型谷蛋白亚基的序列特征分析 | 第120-124页 |
| 4.LMW-GS核酸与蛋白序列的比较分析 | 第124-129页 |
| 5.LMW-M1、LMW-M3和LMW-M5基因编码区中的SNPs和InDels | 第129-130页 |
| 6.LMW-GS与其它醇溶蛋白(Prolamins)基因的进化分析 | 第130-132页 |
| 7.LMW-GS蛋白二级结构的预测 | 第132-133页 |
| 四、讨论 | 第133-140页 |
| 1.LMW-GS的结构特征及其功能特性 | 第136-138页 |
| 2.不同谷物中麦醇溶蛋白(Prolamin)基因的遗传进化关系 | 第138-140页 |
| 结论 | 第140-141页 |
| 参考文献 | 第141-167页 |
| 致谢 | 第167页 |
