| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 第一部分 引言 | 第13-29页 |
| 1.文献综述 | 第13-29页 |
| ·泛素-蛋白酶体系统的组成 | 第13-19页 |
| ·与泛素-蛋白酶体途径有关的生理功能 | 第19-20页 |
| ·26s蛋白酶体亚基的相互作用及生物发生 | 第20-24页 |
| ·26S蛋白酶体的细胞定位 | 第24-25页 |
| ·蛋白质-蛋白质相互作用 | 第25-26页 |
| ·酵母双杂交 | 第26-28页 |
| ·研究简介 | 第28-29页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第29-65页 |
| 2.实验材料 | 第29-40页 |
| ·材料 | 第29-30页 |
| ·仪器设备 | 第30-31页 |
| ·常用溶液的配制 | 第31-40页 |
| 3.实验方法 | 第40-65页 |
| ·从人肝脏组织中提取总RAN | 第40-41页 |
| ·以肝脏总RNA为模板进行RT-PCR | 第41页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第41-45页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第45-46页 |
| ·SDS碱裂解法小量制备质粒DNA | 第46-47页 |
| ·制备感受态大肠杆菌的Inoue方法 | 第47页 |
| ·大肠杆菌转化步骤 | 第47页 |
| ·质粒构建 | 第47-51页 |
| ·酵母双杂交实验 | 第51-53页 |
| ·SDS-PAGE和Western Blot | 第53-55页 |
| ·蛋白的表达和纯化 | 第55-57页 |
| ·体外结合实验 | 第57页 |
| ·抗体制备 | 第57-59页 |
| ·细胞实验方法 | 第59-65页 |
| 第三部分 研究结果 | 第65-104页 |
| 4.人类肝脏26S蛋白酶体亚基因全长ORF的获得 | 第65-81页 |
| ·人肝脏26S蛋白酶体亚基ORF的克隆 | 第65-67页 |
| ·酵母双杂交系统的建立 | 第67页 |
| ·验证26s蛋白酶体亚基蛋白质间相互作用的酵母双杂交系统的 建立 | 第67-69页 |
| ·人26S蛋白酶体亚基基因重组质粒可以在酵母菌S.cerevisiae AH109中正常表达 | 第69-70页 |
| ·26S蛋白酶体亚基之间相互作用 | 第70-81页 |
| 5.体外结合实验验证亚基之间的相互作用 | 第81-89页 |
| ·pGEX4T-2和PET28-a重组质粒的构建 | 第81-83页 |
| ·pGEX4T-2和PET28-a重组质粒在BL21中表达 | 第83-85页 |
| ·GST融合蛋白的纯化 | 第85-86页 |
| ·体外结合实验 | 第86-89页 |
| ·S蛋白酶体亚基在HeLa细胞中共定位 | 第89-104页 |
| ·26S蛋白酶体亚基多克隆抗体的制备 | 第89-93页 |
| ·26S蛋白酶体亚基在HeLa细胞中共定位 | 第93-104页 |
| 第四部分 讨论与结论 | 第104-126页 |
| 7.讨论 | 第104-125页 |
| ·26S蛋白酶体亚基之间的相互作用及生物意义 | 第104-118页 |
| ·不同生物的26S蛋白酶体亚基间相互作用比较 | 第118-123页 |
| ·26S蛋白酶体的细胞内分布及共定位 | 第123-124页 |
| ·展望 | 第124-125页 |
| 8.结论 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-136页 |
| 致谢 | 第136页 |
