| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.课题的提出 | 第10页 |
| 2.前人研究工作 | 第10-21页 |
| ·热激蛋白 | 第10-12页 |
| ·热激蛋白的种类 | 第10-11页 |
| ·热激蛋白的特点 | 第11页 |
| ·热激蛋白在植物体内的功能 | 第11-12页 |
| ·分子伴侣功能 | 第11页 |
| ·热激蛋白与植物的耐热性 | 第11-12页 |
| ·HSPs对植物生长发育的影响 | 第12页 |
| ·HSP90分子伴侣复合体 | 第12-16页 |
| ·HSP90 | 第14-15页 |
| ·HSP70 | 第15页 |
| ·HSP60 | 第15-16页 |
| ·HSP40 | 第16页 |
| ·P23 | 第16页 |
| ·HSP90分子伴侣复合体作用机制 | 第16-17页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第17-21页 |
| ·酵母双杂交系统的原理 | 第18页 |
| ·酵母双杂交系统的应用 | 第18-19页 |
| ·检测已知蛋白之间的相互作用 | 第18页 |
| ·确定蛋白质之间相互作用的重要活性位点 | 第18页 |
| ·发现新的蛋白质和蛋白质的新功能 | 第18-19页 |
| ·筛选药物的作用位点以及药物对蛋白质之间相互作用的影响 | 第19页 |
| ·建立基因组蛋白连锁图 | 第19页 |
| ·酵母双杂交系统的优、缺点 | 第19-20页 |
| ·酵母双杂交系统的优点 | 第19-20页 |
| ·酵母双杂交系统中的常见问题 | 第20页 |
| ·酵母双杂交系统的改进 | 第20页 |
| ·酵母双杂交系统的衍生杂交系统 | 第20-21页 |
| ·三杂交系统 | 第20页 |
| ·SOS恢复系统 | 第20页 |
| ·哺乳动物细胞双杂交系统 | 第20页 |
| ·酵母单杂交系统 | 第20-21页 |
| ·逆向双杂交系统和分裂杂交系统 | 第21页 |
| 3.研究的目的和内容 | 第21-22页 |
| 材料与方法 | 第22-37页 |
| 1 材料 | 第22-24页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·引物及主要分子生物学试剂 | 第22-23页 |
| ·培养基 | 第23-24页 |
| ·大肠杆菌培养基(1000ml) | 第23页 |
| ·酵母培养基 | 第23-24页 |
| ·菌株培养条件及保存 | 第24页 |
| 2 方法 | 第24-37页 |
| ·常用分子生物学实验方法 | 第24-27页 |
| ·PCR反应 | 第24页 |
| ·质粒DNA的小量碱法提取 | 第24-25页 |
| ·电转化感受态细胞的制备 | 第25页 |
| ·感受态细胞的电转化 | 第25-26页 |
| ·质粒的酶切、目标DNA片断的回收与连接 | 第26-27页 |
| ·质粒的酶切 | 第26页 |
| ·目标DNA片段的回收 | 第26页 |
| ·连接反应 | 第26-27页 |
| ·阳性重组克隆的鉴定 | 第27页 |
| ·单酶切或双酶切重组载体的构建 | 第27页 |
| ·酵母菌EGY48的高效转化 | 第27-28页 |
| ·β—半乳糖苷酶(β-Gal)活性的检测 | 第28页 |
| ·自激活作用的检测 | 第28-29页 |
| ·诱饵蛋白自激活作用检测 | 第28-29页 |
| ·检测诱饵质粒和空的文库质粒的相互作用 | 第29页 |
| ·cDNA文库质粒的转化和筛选 | 第29-30页 |
| ·cDNA文库质粒的转化 | 第29页 |
| ·阳性酵母菌落所含质粒的提取 | 第29页 |
| ·文库质粒的筛选 | 第29-30页 |
| ·阳性文库克隆的验证与测序 | 第30页 |
| ·体外蛋白质相互作用的验证 | 第30-33页 |
| ·蛋白质的聚丙烯凝胶电泳(SDS—PAGE) | 第30-31页 |
| ·聚丙烯凝胶的配制 | 第30-31页 |
| ·聚丙烯凝胶电泳 | 第31页 |
| ·考马斯亮蓝染色 | 第31页 |
| ·CBD融合基因载体的构建 | 第31页 |
| ·CBD融合蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| ·BNP23蛋白的纯化 | 第32页 |
| ·体外CBD-PBP1融合蛋白和BNP23蛋白的相互作用 | 第32-33页 |
| ·Western-blotting检测 | 第33-35页 |
| ·蛋白质印迹 | 第34页 |
| ·膜的封闭 | 第34页 |
| ·与一抗进行杂交 | 第34-35页 |
| ·与二抗进行杂交 | 第35页 |
| ·用ECL(Enhanced Chemiluminescence)试剂盒进行检测 | 第35页 |
| ·油菜和拟南芥无菌苗的培养 | 第35页 |
| ·RNA的提取 | 第35页 |
| ·RT-PCR反应 | 第35-36页 |
| ·反转录反应 | 第35-36页 |
| ·PCR反应 | 第36页 |
| ·生物信息学分析方法 | 第36-37页 |
| ·同源基因和同源蛋白质的查找 | 第36页 |
| ·DNA序列或者蛋白质的同源比对 | 第36页 |
| ·蛋白质二级结构的初步预测 | 第36-37页 |
| 结果与分析 | 第37-49页 |
| ·pEG202-BNP23诱饵重组表达质粒的鉴定 | 第37页 |
| ·自激活作用的检测 | 第37-38页 |
| ·拟南芥cDNA文库的筛选和阳性文库质粒的鉴定 | 第38-41页 |
| ·体外BNP23和PBP1蛋白质间相互作用的检测 | 第41-44页 |
| ·PBP1的组织特异性表达 | 第44页 |
| ·油菜MBP6的克隆 | 第44-45页 |
| ·油菜MBP6文库表达质粒及MBP6-1文库表达质粒的构建 | 第45-46页 |
| ·MBP6及MBP6-1与BNP23相互作用的酵母双杂交检测 | 第46-47页 |
| ·PBP1、MBP6与抗病蛋白的Jacalin结构域的保守性分析 | 第47-49页 |
| 讨论 | 第49-52页 |
| ·酵母菌的高效转化 | 第49页 |
| ·假阳性的控制 | 第49页 |
| ·拟南芥cDNA文库在本研究中的重要性 | 第49页 |
| ·黑芥子酶的功能探讨 | 第49-50页 |
| ·BNP23与靶蛋白的作用方式 | 第50页 |
| ·BNP23与抗病的关系 | 第50-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 附录 | 第58-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
