| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| 1 绪论 | 第12-25页 |
| ·虫生真菌防治害虫的意义和优势 | 第12-13页 |
| ·国内外研究现状 | 第13-16页 |
| ·FQ-PCR 技术的研究现状 | 第16-19页 |
| ·ITS 区的基本结构特点及运用 | 第19-20页 |
| ·研究目的 | 第20页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第20-24页 |
| ·本研究的创新点 | 第24-25页 |
| 2 材料和方法 | 第25-35页 |
| ·供试菌株与昆虫 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·东亚飞蝗饲养及东亚飞蝗感染绿僵菌试验 | 第27-28页 |
| ·东亚飞蝗饲养 | 第27-28页 |
| ·供试菌株培养及分生孢子悬浮液的制备 | 第28页 |
| ·东亚飞蝗局部接种绿僵菌 | 第28页 |
| ·东亚飞蝗血淋巴收集与处理 | 第28页 |
| ·DNA 的制备与定量 | 第28-29页 |
| ·东亚飞蝗基因组DNA 的制备 | 第28页 |
| ·绿僵菌基因组DNA 的制备 | 第28-29页 |
| ·DNA 的定量 | 第29页 |
| ·引物设计及引物特异性检测 | 第29-32页 |
| ·扩增克隆CQMa102 rDNA 的非转录区域(ITS) | 第29-31页 |
| ·引物设计与PCR 条件优化 | 第31页 |
| ·引物对的特异性检测 | 第31-32页 |
| ·建立标准曲线 | 第32-33页 |
| ·定量PCR 体系的选择 | 第32-33页 |
| ·建立标准曲线 | 第33页 |
| ·东亚飞蝗血淋巴中制备绿僵菌DNA 模板方法的优化 | 第33-35页 |
| ·蝗虫血细胞和血淋巴物质的去除 | 第33页 |
| ·绿僵菌虫菌体细胞壁的破除 | 第33-34页 |
| ·PCR 抑制物质的去除 | 第34页 |
| ·稳定性测试 | 第34页 |
| ·用基因释放剂获得绿僵菌DNA | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-53页 |
| ·CQMa102 侵染东亚飞蝗的过程 | 第35-36页 |
| ·特异性引物的设计 | 第36-40页 |
| ·ITS 区的扩增 | 第36-37页 |
| ·克隆检测 | 第37页 |
| ·克隆测序结果 | 第37页 |
| ·引物设计与退火温度优化 | 第37-38页 |
| ·特异性检验 | 第38-40页 |
| ·定量PCR 体系的确定 | 第40-45页 |
| ·标准曲线的建立 | 第45-46页 |
| ·从蝗虫血淋巴快速制备绿僵菌DNA 的方法优化 | 第46-50页 |
| ·绿僵菌细胞壁的破坏方法优化 | 第46-47页 |
| ·抑制剂的去除 | 第47-48页 |
| ·与基因释放剂的比较 | 第48-49页 |
| ·制样稳定性测试 | 第49-50页 |
| ·东亚飞蝗的选择 | 第50-51页 |
| ·东亚飞蝗体重分布 | 第50页 |
| ·蝗虫体重对定量PCR 测试结果的影响 | 第50-51页 |
| ·蝗虫虫龄对定量PCR 测试结果的影响 | 第51页 |
| ·绿僵菌在蝗虫体内的增殖 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| ·DNA 的微量提取技术 | 第53-54页 |
| ·定量PCR 检测与常规检测 | 第54页 |
| ·供试昆虫对检测结果的影响 | 第54-55页 |
| ·水解探针与荧光染料 | 第55页 |
| ·定量PCR 的参照系 | 第55-56页 |
| ·PCR 对检测的影响 | 第56-57页 |
| 5 结论与后续工作 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 附录 | 第64-65页 |
| 独创性声明 | 第65页 |
| 学位论文版权使用授权书 | 第65页 |