中文摘要 | 第1-12页 |
英文摘要 | 第12-16页 |
引言 | 第16-18页 |
第一章 文献综述 | 第18-40页 |
·胆碱酯酶概述 | 第18-19页 |
·ACHE的高级结构及底物结合相关位点 | 第19-25页 |
·ACHE高级结构 | 第19-22页 |
·ACHE高级结构中影响底物结合的相关位点 | 第22-25页 |
·代谢三联体 | 第22-23页 |
·酰基口袋 | 第23页 |
·胆碱结合亚部位 | 第23-24页 |
·外周阴离子部位 | 第24页 |
·氧负离子孔 | 第24-25页 |
·生物体内多个胆碱酯酶基因的存在 | 第25-32页 |
·高等动物的ACHE和BUCHE | 第25-27页 |
·文昌鱼中两个胆碱酯酶基因的存在 | 第27页 |
·线虫体内多个ACHE基因的存在 | 第27-28页 |
·非寄生性线虫体内多个ACHE基因的存在 | 第27页 |
·寄生性线虫体内多个ACHE基因的存在 | 第27-28页 |
·微小牛蜱体内多个ACHE基因的存在 | 第28页 |
·昆虫体内多个ACHE基因的存在 | 第28-32页 |
·果蝇体内只存在一个ACHE基因 | 第29页 |
·几种蚊类体内存在两个ACHE基因 | 第29-30页 |
·蚜虫体内两个ACHE基因的研究 | 第30页 |
·其他农业害虫体内可能存在两个ACHE基因 | 第30-32页 |
·ACHE与昆虫抗药性的关系 | 第32-40页 |
·ACHE的动力学参数 | 第32-33页 |
·ACHE量变与昆虫抗药性的关系 | 第33-34页 |
·ACHE基因点突变与昆虫(螨)抗药性的关系 | 第34-40页 |
·Ⅱ型ACHE与昆虫(螨)抗药性相关的突变位点 | 第34-36页 |
·Ⅰ型ACHE与昆虫(螨)抗药性相关的突变位点 | 第36-40页 |
第二章 禾谷缢管蚜、麦长管蚜乙酰胆碱酯酶基因CDNA片段的克隆与序列分析 | 第40-50页 |
·材料与方法 | 第41-44页 |
·供试禾谷缢管蚜和麦长管蚜 | 第41页 |
·主要试剂和仪器 | 第41页 |
·总RNA的提取 | 第41页 |
·单链CDNA的合成 | 第41-42页 |
·PCR反应 | 第42页 |
·PCR产物克隆与测序 | 第42页 |
·感受态大肠杆菌细胞的制备 | 第42-43页 |
·连接反应及连接产物的转化 | 第43-44页 |
·质粒DNA测序 | 第44页 |
·序列分析 | 第44页 |
·结果与分析 | 第44-46页 |
·禾谷缢管蚜和麦长管蚜ACHE基因的克隆 | 第44-45页 |
·序列同源性分析 | 第45-46页 |
·讨论 | 第46-50页 |
第三章 禾谷缢管蚜、麦长管蚜两种乙酰胆碱酯酶基因CDNA全序列的克隆与序列分析 | 第50-63页 |
·材料与方法 | 第51-53页 |
·试虫 | 第51页 |
·主要试剂和仪器 | 第51页 |
·RNA提取及CDNA第一链的合成 | 第51-52页 |
·PCR反应 | 第52-53页 |
·PCR引物设计 | 第52页 |
·PCR反应条件及体系 | 第52-53页 |
·PCR产物回收与纯化 | 第53页 |
·感受态大肠杆菌的制备及连接反应与连接产物的转化 | 第53页 |
·序列分析 | 第53页 |
·结果与分析 | 第53-62页 |
·禾谷缢管蚜麦长管蚜两个ACHE基因CDNA及其推导氨基酸序列 | 第53-60页 |
·禾谷缢管蚜和麦长管蚜两个ACHE基因氨基酸序列同源性分析 | 第60-62页 |
·讨论 | 第62-63页 |
第四章 乙酰胆碱酯酶变异对禾谷缢管蚜和麦长管蚜 | 第63-71页 |
·材料与方法 | 第64-66页 |
·供试昆虫 | 第64页 |
·供试药剂 | 第64页 |
·生物测定 | 第64页 |
·生化测定方法 | 第64-66页 |
·结果与分析 | 第66-69页 |
·禾谷缢管蚜和麦长管蚜抗性品系生物测定结果 | 第66页 |
·抗性品系禾谷缢管蚜和麦长管蚜的酯酶活力变化 | 第66-67页 |
·抗性品系禾谷缢管蚜和麦长管蚜谷胱甘肽-S-转移酶活性测定活力变化 | 第67-68页 |
·抗性品系禾谷缢管蚜和麦长管蚜ACHE生化特性的变化 | 第68页 |
·杀虫剂对抗、感禾谷缢管蚜和麦长管蚜ACHE的抑制能力 | 第68-69页 |
·讨论 | 第69-71页 |
第五章 抗性品系禾谷缢管蚜和麦长管蚜乙酰胆碱酯酶基因的点突变分析 | 第71-85页 |
·材料与方法 | 第72-73页 |
·试虫 | 第72页 |
·主要试剂和仪器 | 第72页 |
·RNA提取及CDNA第一链的合成 | 第72页 |
·引物设计与合成 | 第72-73页 |
·PCR扩增、产物克隆与测序 | 第73页 |
·序列分析 | 第73页 |
·结果与分析 | 第73-79页 |
·讨论 | 第79-85页 |
·禾谷缢管蚜和麦长管蚜点突变分析 | 第79页 |
·关于昆虫ACHE基因突变 | 第79-82页 |
·关于G227位点突变 | 第79-80页 |
·关于F290位点突变 | 第80页 |
·关于Ⅰ型ACHE基因G119位点突变 | 第80-81页 |
·关于Ⅰ型ACHE基因的F331位点突变 | 第81页 |
·关于蚜虫Ⅰ型ACHE基因的S431F和A302S突变 | 第81-82页 |
·抗性品系ACHE基因不存在保守突变原因分析 | 第82-84页 |
·关于蚜虫Ⅰ型及Ⅱ型ACHE基因功能的初步推测 | 第84-85页 |
第六章 两个乙酰胆碱酯酶基因在蚜虫中普遍 | 第85-95页 |
·材料与方法 | 第85-87页 |
·结果与分析 | 第87-89页 |
·讨论 | 第89-95页 |
第七章 乙酰胆碱酯酶基因分子进化分析及起源假说 | 第95-108页 |
·材料与方法 | 第95-99页 |
·胆碱酯酶基因氨基酸序列 | 第95-96页 |
·胆碱酯酶分子系统树的构建 | 第96-99页 |
·结果与分析 | 第99-102页 |
·讨论 | 第102-108页 |
·关于昆虫两个ACHE基因的起源 | 第102-104页 |
·关于昆虫两个ACHE基因的功能 | 第104-106页 |
·关于脊椎动物BUCHE基因的功能 | 第104-105页 |
·关于昆虫两个ACHE基因的功能 | 第105-106页 |
·关于其他酶在有机磷和氨基甲酸酯杀虫剂抗性中的作用 | 第106-108页 |
全文总结 | 第108-109页 |
参考文献 | 第109-124页 |
致谢 | 第124-125页 |
附录 | 第125页 |