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两种麦蚜乙酰胆碱酯酶的分子生物学研究

中文摘要第1-12页
英文摘要第12-16页
引言第16-18页
第一章 文献综述第18-40页
   ·胆碱酯酶概述第18-19页
   ·ACHE的高级结构及底物结合相关位点第19-25页
     ·ACHE高级结构第19-22页
     ·ACHE高级结构中影响底物结合的相关位点第22-25页
       ·代谢三联体第22-23页
       ·酰基口袋第23页
       ·胆碱结合亚部位第23-24页
       ·外周阴离子部位第24页
       ·氧负离子孔第24-25页
   ·生物体内多个胆碱酯酶基因的存在第25-32页
     ·高等动物的ACHE和BUCHE第25-27页
     ·文昌鱼中两个胆碱酯酶基因的存在第27页
     ·线虫体内多个ACHE基因的存在第27-28页
       ·非寄生性线虫体内多个ACHE基因的存在第27页
       ·寄生性线虫体内多个ACHE基因的存在第27-28页
     ·微小牛蜱体内多个ACHE基因的存在第28页
     ·昆虫体内多个ACHE基因的存在第28-32页
       ·果蝇体内只存在一个ACHE基因第29页
       ·几种蚊类体内存在两个ACHE基因第29-30页
       ·蚜虫体内两个ACHE基因的研究第30页
       ·其他农业害虫体内可能存在两个ACHE基因第30-32页
   ·ACHE与昆虫抗药性的关系第32-40页
     ·ACHE的动力学参数第32-33页
     ·ACHE量变与昆虫抗药性的关系第33-34页
     ·ACHE基因点突变与昆虫(螨)抗药性的关系第34-40页
       ·Ⅱ型ACHE与昆虫(螨)抗药性相关的突变位点第34-36页
       ·Ⅰ型ACHE与昆虫(螨)抗药性相关的突变位点第36-40页
第二章 禾谷缢管蚜、麦长管蚜乙酰胆碱酯酶基因CDNA片段的克隆与序列分析第40-50页
   ·材料与方法第41-44页
     ·供试禾谷缢管蚜和麦长管蚜第41页
     ·主要试剂和仪器第41页
     ·总RNA的提取第41页
     ·单链CDNA的合成第41-42页
     ·PCR反应第42页
     ·PCR产物克隆与测序第42页
     ·感受态大肠杆菌细胞的制备第42-43页
     ·连接反应及连接产物的转化第43-44页
     ·质粒DNA测序第44页
     ·序列分析第44页
   ·结果与分析第44-46页
     ·禾谷缢管蚜和麦长管蚜ACHE基因的克隆第44-45页
     ·序列同源性分析第45-46页
   ·讨论第46-50页
第三章 禾谷缢管蚜、麦长管蚜两种乙酰胆碱酯酶基因CDNA全序列的克隆与序列分析第50-63页
   ·材料与方法第51-53页
     ·试虫第51页
     ·主要试剂和仪器第51页
     ·RNA提取及CDNA第一链的合成第51-52页
     ·PCR反应第52-53页
       ·PCR引物设计第52页
       ·PCR反应条件及体系第52-53页
       ·PCR产物回收与纯化第53页
     ·感受态大肠杆菌的制备及连接反应与连接产物的转化第53页
     ·序列分析第53页
   ·结果与分析第53-62页
     ·禾谷缢管蚜麦长管蚜两个ACHE基因CDNA及其推导氨基酸序列第53-60页
     ·禾谷缢管蚜和麦长管蚜两个ACHE基因氨基酸序列同源性分析第60-62页
   ·讨论第62-63页
第四章 乙酰胆碱酯酶变异对禾谷缢管蚜和麦长管蚜第63-71页
   ·材料与方法第64-66页
     ·供试昆虫第64页
     ·供试药剂第64页
     ·生物测定第64页
       ·生化测定方法第64-66页
   ·结果与分析第66-69页
     ·禾谷缢管蚜和麦长管蚜抗性品系生物测定结果第66页
     ·抗性品系禾谷缢管蚜和麦长管蚜的酯酶活力变化第66-67页
     ·抗性品系禾谷缢管蚜和麦长管蚜谷胱甘肽-S-转移酶活性测定活力变化第67-68页
     ·抗性品系禾谷缢管蚜和麦长管蚜ACHE生化特性的变化第68页
     ·杀虫剂对抗、感禾谷缢管蚜和麦长管蚜ACHE的抑制能力第68-69页
   ·讨论第69-71页
第五章 抗性品系禾谷缢管蚜和麦长管蚜乙酰胆碱酯酶基因的点突变分析第71-85页
   ·材料与方法第72-73页
     ·试虫第72页
     ·主要试剂和仪器第72页
     ·RNA提取及CDNA第一链的合成第72页
     ·引物设计与合成第72-73页
     ·PCR扩增、产物克隆与测序第73页
     ·序列分析第73页
   ·结果与分析第73-79页
   ·讨论第79-85页
     ·禾谷缢管蚜和麦长管蚜点突变分析第79页
     ·关于昆虫ACHE基因突变第79-82页
       ·关于G227位点突变第79-80页
       ·关于F290位点突变第80页
       ·关于Ⅰ型ACHE基因G119位点突变第80-81页
       ·关于Ⅰ型ACHE基因的F331位点突变第81页
       ·关于蚜虫Ⅰ型ACHE基因的S431F和A302S突变第81-82页
     ·抗性品系ACHE基因不存在保守突变原因分析第82-84页
     ·关于蚜虫Ⅰ型及Ⅱ型ACHE基因功能的初步推测第84-85页
第六章 两个乙酰胆碱酯酶基因在蚜虫中普遍第85-95页
   ·材料与方法第85-87页
   ·结果与分析第87-89页
   ·讨论第89-95页
第七章 乙酰胆碱酯酶基因分子进化分析及起源假说第95-108页
   ·材料与方法第95-99页
     ·胆碱酯酶基因氨基酸序列第95-96页
     ·胆碱酯酶分子系统树的构建第96-99页
   ·结果与分析第99-102页
   ·讨论第102-108页
     ·关于昆虫两个ACHE基因的起源第102-104页
     ·关于昆虫两个ACHE基因的功能第104-106页
       ·关于脊椎动物BUCHE基因的功能第104-105页
       ·关于昆虫两个ACHE基因的功能第105-106页
     ·关于其他酶在有机磷和氨基甲酸酯杀虫剂抗性中的作用第106-108页
全文总结第108-109页
参考文献第109-124页
致谢第124-125页
附录第125页

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