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猪圆环病毒2型的分子流行病学分析及病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达

摘要第1-7页
Abstract第7-15页
第一章 绪论第15-32页
   ·猪圆环病毒病原学第15-18页
     ·猪圆环病毒的基因组结构第15-16页
     ·猪圆环病毒主要编码蛋白的结构与功能第16-18页
   ·猪圆环病毒的分类第18-19页
   ·猪圆环病毒 2 型的流行病学第19-23页
     ·猪圆环病毒 2 型的流行概况第19-20页
     ·猪圆环病毒 2 型流行毒株的变化第20-22页
     ·PCV2 的传播第22-23页
   ·PCV2 感染引起的疾病第23-24页
   ·PCVAD 的发病机理第24-25页
   ·PCVAD 相关致病因素第25-28页
     ·PCV2 的动态感染第25-26页
     ·饲养管理第26页
     ·宿主因素第26页
     ·病原的混合感染第26-27页
     ·免疫调节第27-28页
   ·PCV2 的疫苗研究现状第28-31页
     ·原型疫苗第28-29页
     ·商品化疫苗第29-31页
   ·本研究的立题依据与研究意义第31-32页
第二章 2008-2011 年中国部分地区猪圆环病毒 2 型的分子流行病学调查第32-45页
   ·材料和方法第32-36页
     ·样品采集第32-33页
     ·主要菌株、试剂、载体第33页
     ·样品处理及DNA的提取第33页
     ·引物设计第33页
     ·样品中PCV2的检测第33-34页
     ·部分阳性样品PCV2 ORF2全序列的扩增第34页
     ·PCV2 ORF2 序列的克隆与鉴定第34-35页
     ·序列的测定与分析第35-36页
   ·实验结果第36-43页
     ·样品 PCV2 的 PCR 检测结果第36-37页
     ·采集样品的 PCV2 感染统计结果第37-38页
     ·部分阳性样品的 PCV2 ORF2 核苷酸序列分析第38-39页
     ·部分阳性样品的 PCV2 ORF2 氨基酸序列分析第39-43页
   ·讨论第43-45页
第三章 猪圆环病毒衣壳蛋白在昆虫细胞中的表达第45-65页
   ·材料和方法第45-55页
     ·细胞、菌株与抗体第45页
     ·载体与质粒第45页
     ·主要试剂与主要仪器设备第45-46页
     ·目的基因的扩增第46页
     ·杆状病毒转移载体的构建与鉴定第46-49页
     ·重组穿梭杆粒 rBacmid-cap 和 rBacmid- opt-cap 的构建与制备第49-50页
     ·P1代重组杆状病毒的获得第50-51页
     ·P2代重组杆状病毒的扩增、鉴定及滴度测定第51-52页
     ·重组杆状病毒扩增条件的优化第52-53页
     ·目的蛋白在Sf9昆虫细胞中的表达鉴定及表达量的比较第53-55页
     ·目的蛋白在Sf9昆虫细胞中表达条件的优化第55页
     ·猪圆环病毒PCV1A/1B VLPs的电镜观察第55页
   ·结果第55-63页
     ·PCV1A/1B ORF2基因密码子的优化第55-56页
     ·PCV1A/1B野生型和密码子优化型ORF2基因片段的扩增第56页
     ·重组转移质粒的酶切鉴定第56-57页
     ·重组穿梭载体的PCR鉴定第57页
     ·P2代重组杆状病毒的滴度测定和PCR鉴定第57-58页
     ·重组杆状病毒扩增条件的优化第58-59页
     ·P3 代重组杆状病毒的扩增和滴度测定第59页
     ·间接免疫荧光检测目的蛋白的表达第59-60页
     ·SDS-PAGE和Western-blotting检测第60-61页
     ·目的蛋白在Sf9昆虫细胞中表达条件优化结果第61-62页
     ·猪圆环病毒PCV1A/1B病毒样颗粒的电镜观察第62-63页
   ·讨论第63-65页
第四章 全文结论第65-66页
参考文献第66-83页
附录第83-84页
致谢第84-85页
作者简历第85页

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