| 内容提要 | 第1-3页 |
| 英文文摘 | 第3-7页 |
| 序言 | 第7-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第9-31页 |
| 1 基因工程制药的研究概况 | 第9-11页 |
| 2 骨形态发生蛋白的研究与应用 | 第11-20页 |
| ·BMPs及其受体 | 第11-13页 |
| ·BMPs的生物学特性 | 第13-16页 |
| ·BMPs在临床应用中的研究 | 第16-20页 |
| 3 毕赤酵母真核表达系统 | 第20-31页 |
| ·几种不同表达体系和毕赤酵母表达系统的特性及比较 | 第20-21页 |
| ·毕赤酵母表达系统的特点 | 第21-22页 |
| ·影响外源蛋白在毕赤酵母中表达的因素 | 第22-31页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第31-43页 |
| 1 材料 | 第31-34页 |
| ·菌株和载体 | 第31页 |
| ·工具酶 | 第31页 |
| ·其它试剂 | 第31页 |
| ·常用培养基和缓冲液 | 第31-33页 |
| ·寡聚核甘酸引物 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33-34页 |
| 2 实验方法 | 第34-43页 |
| ·表达质粒的制备 | 第34-35页 |
| ·重组质粒转化酵母感受态细胞 | 第35页 |
| ·重组酵母的筛选 | 第35-37页 |
| ·重组酵母细胞的诱导表达 | 第37页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第37-39页 |
| ·发酵条件的优化 | 第39-40页 |
| ·表达产物的分离纯化 | 第40-41页 |
| ·纯化产物的处理 | 第41页 |
| ·表达产物的定量分析 | 第41-42页 |
| ·纯化蛋白的理化性质检测 | 第42-43页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第43-56页 |
| 1 表达质粒的制备 | 第43页 |
| 2 酵母转化子筛选及鉴定 | 第43-47页 |
| ·酵母转化子的筛选工作汇总 | 第43-45页 |
| ·PCR筛选及鉴定 | 第45-46页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第46页 |
| ·Dot-Blotting鉴定 | 第46-47页 |
| 3 发酵条件的优化 | 第47-52页 |
| ·不同初始pH值的培养基对蛋白表达的影响 | 第47-48页 |
| ·初始诱导时的菌体密度(诱导OD)对蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
| ·甲醇诱导时间对蛋白表达的影响 | 第49-51页 |
| ·甲醇诱导浓度对蛋白表达的影响 | 第51-52页 |
| 4 表达产物的柱层析法纯化 | 第52-53页 |
| 5 纯化产物的鉴定 | 第53-54页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第53页 |
| ·Western Blotting鉴定 | 第53-54页 |
| 6 表达产物的定量分析 | 第54-55页 |
| 7 纯化产物rhBMP4和rhBMP7的表观特征与溶解性 | 第55-56页 |
| 第四部分 小结与讨论 | 第56-63页 |
| 1 菌株表型 | 第56页 |
| 2 外源基因 | 第56-59页 |
| 3 转化效率 | 第59-60页 |
| 4 培养基 | 第60页 |
| 5 pH值 | 第60-61页 |
| 6 菌体密度 | 第61页 |
| 7 甲醇浓度 | 第61页 |
| 8 表达量 | 第61-62页 |
| 9 糖基化 | 第62-63页 |
| 英文缩略词表 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-74页 |
| 中文摘要 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78页 |