| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-28页 |
| 一、 材料与方法 | 第28-47页 |
| 1 材料 | 第28-33页 |
| ·病毒 | 第28页 |
| ·细胞系 | 第28页 |
| ·质粒 | 第28页 |
| ·试剂及配制 | 第28-31页 |
| ·仪器 | 第31-32页 |
| ·引物 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-47页 |
| ·技术路线 | 第33-35页 |
| ·引物设计 | 第35-36页 |
| ·ERA疫苗株的处理 | 第36页 |
| ·病毒总RNA的提取 | 第36页 |
| ·RT-PCR | 第36-37页 |
| ·电泳及PCR产物分析 | 第37页 |
| ·PCR产物胶回收 | 第37-38页 |
| ·连接 | 第38-39页 |
| ·转化 | 第39页 |
| ·筛选 | 第39页 |
| ·抽提质粒 | 第39-40页 |
| ·酶切和PCR鉴定 | 第40-41页 |
| ·重组杆状病毒表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·重组真核表达载体的构建 | 第43-44页 |
| ·阳性重组质粒的纯化 | 第44页 |
| ·重组DH5a的保存 | 第44页 |
| ·重组质粒的保存 | 第44-45页 |
| ·G418毒性敏感性检测 | 第45页 |
| ·脂质体介导的重组质粒转染BHK21细胞及抗性细胞的筛选 | 第45-46页 |
| ·G基因部分片段缺失mRNA表达检测 | 第46页 |
| ·冻存细胞 | 第46-47页 |
| 二、 结果 | 第47-60页 |
| 1 各基因片段的扩增及回收 | 第47-49页 |
| 2 重组质粒的酶切或PCR鉴定 | 第49-52页 |
| 3 重组杆状病毒表达载体的构建及鉴定 | 第52-54页 |
| ·重组杆状病毒转移载体PA-G的构建及鉴定 | 第52页 |
| ·重组杆状病毒缺失转移载体的构建及鉴定 | 第52-54页 |
| 4 重组真核表达载体的构建及鉴定 | 第54-56页 |
| 5 BHK21细胞对不同浓度G418毒性的敏感性 | 第56页 |
| 6 脂质体介导的重组质粒转染BHK21细胞及抗性细胞的筛选 | 第56-59页 |
| 7 G基因部分片段缺失mRNA表达检测 | 第59-60页 |
| 三、 讨论 | 第60-65页 |
| 1 重组杆状病毒缺失G基因转移载体的构建 | 第60-61页 |
| 2 脂质体介导的重组质粒转染BHK21细胞及抗性细胞的筛选 | 第61-63页 |
| 3 本实验存在的问题与不足 | 第63页 |
| 4 关于转染效率低的问题 | 第63-64页 |
| 5 下一步应开展的研究工作 | 第64-65页 |
| 四. 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
