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烟草TAT基因和拟南芥AT103基因的克隆与功能分析

中文摘要第1-8页
英文摘要第8-10页
英文缩略表第10-12页
1. 引言第12-20页
 1.1 叶绿素合成的研究进展第12-15页
 1.2 碱性亮氨酸拉链蛋白的研究进展第15-17页
 1.3 植物中脂肪酸去饱和酶研究进展第17-19页
 1.4 本课题的研究目的及意义第19-20页
2. 材料与方法第20-34页
 2.1 试验材料第20-21页
 2.2 试验方法第21-34页
  2.2.1 烟草(拟南芥)无菌苗的种植第21页
  2.2.2 烟草TAT序列的克隆第21-24页
   2.2.2.1 利用TRIZOL试剂盒提取RNA第21-22页
   2.2.2.2 RNA反转录及cDNA纯化第22-23页
   2.2.2.3 烟草TAT基因的3'RACE第23-24页
   2.2.2.4 烟草TAT基因的5'RACE第24页
   2.2.2.5 烟草TAT基因全长片段的获得第24页
   2.2.2.6 烟草TAT基因同源基因片段的克隆第24页
  2.2.3 拟南芥AT103序列的克隆第24-25页
   2.2.3.1 拟南芥总RNA提取和反转录第24页
   2.2.3.2 拟南芥RT-PCR扩增第24-25页
  2.2.4 拟南芥AT103及烟草TAT基因的克隆及测序第25-28页
   2.2.4.1 大肠杆菌感受态细胞的制备第25-26页
   2.2.4.2 连接第26页
   2.2.4.3 转化及克隆筛选第26页
   2.2.4.5 碱法小量提取质粒DNA及酶切鉴定第26-27页
   2.2.4.6 序列测定第27-28页
  2.2.5 表达载体的构建第28-29页
   2.2.5.1 碱法大量提取质粒DNA第28-29页
   2.2.5.2 载体构建第29页
  2.2.6 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备及转化第29-30页
   2.2.6.1 农杆菌感受态细胞的制备第29页
   2.2.6.2 冻融法转化农杆菌第29-30页
  2.2.7 利用农杆菌介导转化拟南芥和烟草第30-31页
   2.2.7.1 农杆菌介导转化拟南芥第30页
   2.2.7.2 农杆菌介导法转化烟草第30-31页
  2.2.8 转基因拟南芥和烟草植株的PCR检测第31-32页
  2.2.9 Northern杂交分析第32-33页
  2.2.10 植物叶绿素含量的测定第33页
  2.2.11 植株光合速率与相关参数的测定第33页
  2.2.12 植物叶片的荧光测定第33-34页
3. 结果与分析第34-53页
 3.1 拟南芥AT103基因的克隆第34-36页
  3.1.1 拟南芥RNA的提取及反转录第34页
  3.1.2 拟南芥RT-PCR第34-35页
  3.1.3 拟南芥AT103基因的克隆及测序第35-36页
 3.2 烟草TAT基因的克隆第36-43页
  3.2.1 烟草总RNA的提取及反转录第36-38页
  3.2.2 烟草TAT基因3'端的克隆与测序第38页
  3.2.3 烟草TAT基因5'端的克隆与测序第38-39页
  3.2.4 烟草TAT基因全长序列的获得第39-43页
  3.2.5 烟草TAT同源片段的克隆及测序第43页
 3.3 烟草TAT基因表达分析第43-45页
 3.4 拟南芥和烟草反义表达载体pBI-AT和pBI-TAT的构建第45-46页
  3.4.1 拟南芥反义表达载体pBI-AT的构建第45-46页
  3.4.2 烟草反义表达载体pBI-TAT的构建第46页
 3.5 质粒pBI-AT和pBI-TAT转化农杆菌第46页
 3.6 拟南芥和烟草转基因植株的获得第46-48页
  3.6.1 转基因拟南芥的获得第46-47页
  3.6.2 转基因烟草的获得第47-48页
 3.7 转基因烟草的PCR检测第48页
 3.8 转基因烟草的Northern杂交检测第48-49页
 3.9 烟草叶绿素含量的测定第49-50页
 3.10 转基因烟草的光合参数测定第50-51页
 3.11 转基因烟草的荧光参数测定第51-53页
4. 讨论第53-59页
 4.1 烟草TAT基因及其同源基因之间的序列分析第53-54页
 4.2 烟草TAT基因及其同源基因所编码的蛋白质广泛存在于光合微生物和高等植物之中,构成了一类新的蛋白质家族第54页
 4.3 烟草TAT基因的表达模式与其功能的关系第54-55页
 4.4 烟草TAT基因所编码的蛋白质可能是叶绿素的合成过程的一种酶第55-56页
 4.5 烟草TAT基因所编码及其同源基因所编码的蛋白质可能是叶绿素与血红素的合成中共同途径上起作用第56-57页
 4.6 烟草TAT基因及其同源基因所编码的蛋白质这一类新的蛋白质家族可能的作用机理和方式第57-59页
5. 结论第59-60页
参考文献第60-69页
致谢第69页

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