中文摘要 | 第1-8页 |
英文摘要 | 第8-10页 |
英文缩略表 | 第10-12页 |
1. 引言 | 第12-20页 |
1.1 叶绿素合成的研究进展 | 第12-15页 |
1.2 碱性亮氨酸拉链蛋白的研究进展 | 第15-17页 |
1.3 植物中脂肪酸去饱和酶研究进展 | 第17-19页 |
1.4 本课题的研究目的及意义 | 第19-20页 |
2. 材料与方法 | 第20-34页 |
2.1 试验材料 | 第20-21页 |
2.2 试验方法 | 第21-34页 |
2.2.1 烟草(拟南芥)无菌苗的种植 | 第21页 |
2.2.2 烟草TAT序列的克隆 | 第21-24页 |
2.2.2.1 利用TRIZOL试剂盒提取RNA | 第21-22页 |
2.2.2.2 RNA反转录及cDNA纯化 | 第22-23页 |
2.2.2.3 烟草TAT基因的3'RACE | 第23-24页 |
2.2.2.4 烟草TAT基因的5'RACE | 第24页 |
2.2.2.5 烟草TAT基因全长片段的获得 | 第24页 |
2.2.2.6 烟草TAT基因同源基因片段的克隆 | 第24页 |
2.2.3 拟南芥AT103序列的克隆 | 第24-25页 |
2.2.3.1 拟南芥总RNA提取和反转录 | 第24页 |
2.2.3.2 拟南芥RT-PCR扩增 | 第24-25页 |
2.2.4 拟南芥AT103及烟草TAT基因的克隆及测序 | 第25-28页 |
2.2.4.1 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
2.2.4.2 连接 | 第26页 |
2.2.4.3 转化及克隆筛选 | 第26页 |
2.2.4.5 碱法小量提取质粒DNA及酶切鉴定 | 第26-27页 |
2.2.4.6 序列测定 | 第27-28页 |
2.2.5 表达载体的构建 | 第28-29页 |
2.2.5.1 碱法大量提取质粒DNA | 第28-29页 |
2.2.5.2 载体构建 | 第29页 |
2.2.6 根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备及转化 | 第29-30页 |
2.2.6.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
2.2.6.2 冻融法转化农杆菌 | 第29-30页 |
2.2.7 利用农杆菌介导转化拟南芥和烟草 | 第30-31页 |
2.2.7.1 农杆菌介导转化拟南芥 | 第30页 |
2.2.7.2 农杆菌介导法转化烟草 | 第30-31页 |
2.2.8 转基因拟南芥和烟草植株的PCR检测 | 第31-32页 |
2.2.9 Northern杂交分析 | 第32-33页 |
2.2.10 植物叶绿素含量的测定 | 第33页 |
2.2.11 植株光合速率与相关参数的测定 | 第33页 |
2.2.12 植物叶片的荧光测定 | 第33-34页 |
3. 结果与分析 | 第34-53页 |
3.1 拟南芥AT103基因的克隆 | 第34-36页 |
3.1.1 拟南芥RNA的提取及反转录 | 第34页 |
3.1.2 拟南芥RT-PCR | 第34-35页 |
3.1.3 拟南芥AT103基因的克隆及测序 | 第35-36页 |
3.2 烟草TAT基因的克隆 | 第36-43页 |
3.2.1 烟草总RNA的提取及反转录 | 第36-38页 |
3.2.2 烟草TAT基因3'端的克隆与测序 | 第38页 |
3.2.3 烟草TAT基因5'端的克隆与测序 | 第38-39页 |
3.2.4 烟草TAT基因全长序列的获得 | 第39-43页 |
3.2.5 烟草TAT同源片段的克隆及测序 | 第43页 |
3.3 烟草TAT基因表达分析 | 第43-45页 |
3.4 拟南芥和烟草反义表达载体pBI-AT和pBI-TAT的构建 | 第45-46页 |
3.4.1 拟南芥反义表达载体pBI-AT的构建 | 第45-46页 |
3.4.2 烟草反义表达载体pBI-TAT的构建 | 第46页 |
3.5 质粒pBI-AT和pBI-TAT转化农杆菌 | 第46页 |
3.6 拟南芥和烟草转基因植株的获得 | 第46-48页 |
3.6.1 转基因拟南芥的获得 | 第46-47页 |
3.6.2 转基因烟草的获得 | 第47-48页 |
3.7 转基因烟草的PCR检测 | 第48页 |
3.8 转基因烟草的Northern杂交检测 | 第48-49页 |
3.9 烟草叶绿素含量的测定 | 第49-50页 |
3.10 转基因烟草的光合参数测定 | 第50-51页 |
3.11 转基因烟草的荧光参数测定 | 第51-53页 |
4. 讨论 | 第53-59页 |
4.1 烟草TAT基因及其同源基因之间的序列分析 | 第53-54页 |
4.2 烟草TAT基因及其同源基因所编码的蛋白质广泛存在于光合微生物和高等植物之中,构成了一类新的蛋白质家族 | 第54页 |
4.3 烟草TAT基因的表达模式与其功能的关系 | 第54-55页 |
4.4 烟草TAT基因所编码的蛋白质可能是叶绿素的合成过程的一种酶 | 第55-56页 |
4.5 烟草TAT基因所编码及其同源基因所编码的蛋白质可能是叶绿素与血红素的合成中共同途径上起作用 | 第56-57页 |
4.6 烟草TAT基因及其同源基因所编码的蛋白质这一类新的蛋白质家族可能的作用机理和方式 | 第57-59页 |
5. 结论 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-69页 |
致谢 | 第69页 |