| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-11页 |
| 第二章 材料与方法 | 第11-24页 |
| 2．1 菌株及质粒 | 第11-12页 |
| 2．2 植物材料 | 第12页 |
| 2．3 培养基及生长条件 | 第12-13页 |
| 2．3．1 培养基 | 第12-13页 |
| 2．3．2 生长条件 | 第13页 |
| 2．3．3 菌种保存 | 第13页 |
| 2．4 抗生素 | 第13-14页 |
| 2．5 溶液、缓冲液和试剂 | 第14页 |
| 2．6 质粒DNA的提取及纯化 | 第14-16页 |
| 2．6．1 碱裂解法提取质粒DNA | 第14-15页 |
| 2．6．2 大量制备质粒 | 第15页 |
| 2．6．3 质粒DNA的纯化与沉淀 | 第15-16页 |
| 2．7 电泳 | 第16页 |
| 2．8 DNA酶切 | 第16-17页 |
| 2．8．1 DNA的限制性内切酶酶切 | 第16页 |
| 2．8．2 酶切DNA片段的CIP处理 | 第16-17页 |
| 2．9 DNA酶切片段的分离与回收 | 第17页 |
| 2．9．1 从低熔点胶中回收DNA片段 | 第17页 |
| 2．9．2 试剂盒法回收DNA片段 | 第17页 |
| 2．10 DNA的连接 | 第17-18页 |
| 2．11 质粒DNA的转化 | 第18-19页 |
| 2．11．1 感受态细胞的制备 | 第18页 |
| 2．11．2 转化反应 | 第18页 |
| 2．11．3 质粒DNA的电脉冲导入大肠杆菌 | 第18页 |
| 2．11．4 质粒DNA的电脉冲导入大豆慢生根瘤菌 | 第18-19页 |
| 2．12 根瘤菌总DNA的提取 | 第19-20页 |
| 2．12．1 快速提取 | 第19页 |
| 2．12．2 根瘤菌总DNA的大量提取 | 第19-20页 |
| 2．13 二亲本接合及二亲本接合 | 第20页 |
| 2．14 标记置换诱变方法 | 第20-21页 |
| 2．15 PCR扩增 | 第21页 |
| 2．16 Tail-PCR | 第21-22页 |
| 2．17 β-葡糖苷酸酶活性检测 | 第22-23页 |
| 2．18 大豆温室水培试验方法 | 第23页 |
| 2．18．1 供试菌株 | 第23页 |
| 2．18．2 植物材料 | 第23页 |
| 2．18．3 大豆水培试验 | 第23页 |
| 2．18．4 结瘤时间观察 | 第23页 |
| 2．19 根瘤菌中根瘤的分离 | 第23-24页 |
| 第三章 转座子Tn5gusA5诱变慢生型大豆根瘤菌22-10筛选春雷霉素突变体（Ksg-R） | 第24-27页 |
| 3．1 引言 | 第24页 |
| 3．2 利用转座子Tn5gusA5诱变22-10并筛选ksg-r突变体 | 第24-25页 |
| 3．3 检测Tn5gusA5转座子的gusA的基因的表达及突变株的Tc敏感性 | 第25页 |
| 3．4 PCR分析Tn5gusA5是否插入染色体上 | 第25页 |
| 3．5 22-10抗春雷霉素突变体结瘤能力检测 | 第25-26页 |
| 3．6 讨论 | 第26-27页 |
| 第四章 慢生型大豆根瘤菌22-10的春雷霉素敏感基因（KsgA）的PCR扩增 | 第27-36页 |
| 4．1 引言 | 第27页 |
| 4．2 慢生型大豆根瘤菌22-10 ksgA基因部分序列的确定 | 第27-31页 |
| 4．2．1 引物设计 | 第27-29页 |
| 4．2．2 慢生型大豆根瘤菌22-10 ksgA基因部分片段序列的扩增 | 第29页 |
| 4．2．3 PCR产物回收测序及分析 | 第29-31页 |
| 4．3 慢生型大豆根瘤菌22-10ksgA基因全序列的确定 | 第31-35页 |
| 4．3．1 引物设计 | 第31-32页 |
| 4．3．2 Tail-PCR体系及程序 | 第32-33页 |
| 4．3．3 慢生型大豆根瘤菌ksgA基因全序列的扩增 | 第33-34页 |
| 4．3．4 慢生型大豆根瘤菌22-10ksgA基因全序列的同源性比较 | 第34-35页 |
| 4．4 讨论 | 第35-36页 |
| 第五章 慢生型大豆根瘤菌22-10 ksgA基因的功能鉴定 | 第36-45页 |
| 5．1 引言 | 第36页 |
| 5．2 慢生型大豆根瘤菌ksgA基因缺失结构体的构建 | 第36-39页 |
| 5．2．1 引物设计 | 第36页 |
| 5．2．2 PCR扩增B．jksgA基因的缺失结构体 | 第36-39页 |
| 5．2．2．1 ksgA基因旁侧序列的扩增 | 第36-37页 |
| 5．2．2．2 卡那霉素抗性基因的ORF的扩增 | 第37页 |
| 5．2．2．3 PCR连接 | 第37-39页 |
| 5．3 22-10 B．jksgA基因置换突变体的构建 | 第39-41页 |
| 5．3．1 重组质粒pIJ32LksgA的构建 | 第39-40页 |
| 5．3．2 标记置换 | 第40-41页 |
| 5．4 PCR确证LksgA结构是否交换上22-10的染色体 | 第41-43页 |
| 5．5 B．japonicum22-10ksgA基因置换突变体结瘤能力检测 | 第43页 |
| 5．6 讨论 | 第43-45页 |
| 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
