| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 前言 | 第13-27页 |
| 1 松杉灵芝概述 | 第13-14页 |
| ·松杉灵芝简介 | 第13页 |
| ·松杉灵芝的生物学特性 | 第13-14页 |
| ·形态特征 | 第13页 |
| ·生长特性 | 第13-14页 |
| 2 漆酶概述 | 第14-18页 |
| ·漆酶简介 | 第14-15页 |
| ·漆酶在食用菌中的生物功能 | 第15-16页 |
| ·漆酶基因克隆 | 第16-17页 |
| ·TAIL-PCR | 第17-18页 |
| 3 qRT-PCR | 第18-25页 |
| ·原理 | 第19-20页 |
| ·检测模式 | 第20-21页 |
| ·SYBR Green I 检测模式 | 第20页 |
| ·TaqMan 探针检测模式 | 第20-21页 |
| ·定量方法 | 第21-22页 |
| ·绝对定量 | 第21页 |
| ·相对定量 | 第21-22页 |
| ·qRT-PCR 试验结果的影响因素 | 第22-25页 |
| ·RNA 的纯度和完整性 | 第22页 |
| ·基因组 DNA 污染 | 第22-23页 |
| ·反转录效率 | 第23页 |
| ·PCR 扩增 | 第23页 |
| ·内参基因的选择 | 第23-25页 |
| ·qRT-PCR 应用 | 第25页 |
| 4 本课题研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 第一章 松杉灵芝漆酶基因的克隆 | 第27-53页 |
| 1 材料与方法 | 第27-37页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·供试菌株 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27-29页 |
| ·仪器 | 第29页 |
| ·方法 | 第29-37页 |
| ·供试菌株的活化及菌丝收集 | 第29-30页 |
| ·松杉灵芝基因组 DNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·松杉灵芝 RNA 的提取 | 第31页 |
| ·漆酶基因的 PCR 扩增 | 第31-36页 |
| ·胶回收目的片段 | 第36页 |
| ·胶回收片段与 T-载体的连接 | 第36页 |
| ·质粒的转化 | 第36-37页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第37页 |
| ·质粒提取 | 第37页 |
| ·测序 | 第37页 |
| 2 结果与分析 | 第37-51页 |
| ·松杉灵芝基因组 DNA 的提取 | 第37-38页 |
| ·松杉灵芝 RNA 的提取 | 第38页 |
| ·松杉灵芝漆酶基因部分序列的获得 | 第38-43页 |
| ·简并 PCR | 第38-39页 |
| ·扩增片段的胶回收纯化 | 第39页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第39-40页 |
| ·阳性克隆的测序 | 第40-43页 |
| ·松杉灵芝漆酶基因 5'端和 3'端侧翼序列的获得 | 第43-48页 |
| ·松杉灵芝漆酶基因 5'端侧翼序列的扩增 | 第43-44页 |
| ·松杉灵芝漆酶基因 3'端侧翼序列的扩增 | 第44页 |
| ·扩增片段的胶回收纯化 | 第44-45页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第45-46页 |
| ·阳性克隆的测序 | 第46-48页 |
| ·松杉灵芝漆酶基因组 DNA 全序列的获得 | 第48页 |
| ·松杉灵芝漆酶 cDNA 序列的获得 | 第48-50页 |
| ·松杉灵芝漆酶 cDNA 序列的扩增 | 第48页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第48-49页 |
| ·阳性克隆的测序 | 第49-50页 |
| ·松杉灵芝漆酶基因的序列分析 | 第50-51页 |
| 3 小结与讨论 | 第51-53页 |
| 第二章 松杉灵芝实时荧光定量 PCR 内参基因的筛选 | 第53-71页 |
| 1 材料与方法 | 第53-58页 |
| ·材料 | 第53-55页 |
| ·供试菌株 | 第53页 |
| ·培养基 | 第53-54页 |
| ·试剂 | 第54页 |
| ·仪器 | 第54-55页 |
| ·方法 | 第55-58页 |
| ·供试菌株的活化及菌丝收集 | 第55页 |
| ·松杉灵芝 RNA 的提取 | 第55页 |
| ·内参基因引物的设计和合成 | 第55-56页 |
| ·cDNA 第一链合成 | 第56页 |
| ·各内参基因的普通 PCR 扩增 | 第56页 |
| ·各内参基因的 qRT-PCR 扩增 | 第56-57页 |
| ·胶回收目的片段 | 第57页 |
| ·胶回收片段与 T-载体的连接 | 第57页 |
| ·质粒的转化 | 第57页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第57页 |
| ·质粒提取 | 第57页 |
| ·测序 | 第57-58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-69页 |
| ·松杉灵芝 RNA 的提取 | 第58-59页 |
| ·内参基因引物特异性分析 | 第59-62页 |
| ·内参基因片段的普通 PCR 扩增 | 第59-60页 |
| ·内参基因片段的测序 | 第60-61页 |
| ·融解曲线 | 第61-62页 |
| ·内参基因的 qRT-PCR 分析 | 第62-69页 |
| ·内参基因标准曲线的制备 | 第62-67页 |
| ·内参基因的选择 | 第67-69页 |
| 3 小结与讨论 | 第69-71页 |
| 第三章 qRT-PCR 分析松杉灵芝漆酶基因的表达水平 | 第71-81页 |
| 1 材料与方法 | 第71-74页 |
| ·材料 | 第71-72页 |
| ·供试菌株 | 第71页 |
| ·培养基 | 第71页 |
| ·试剂 | 第71-72页 |
| ·仪器 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-74页 |
| ·供试菌株的活化及菌丝的培养 | 第72页 |
| ·ABTS 法测定漆酶酶活 | 第72-73页 |
| ·松杉灵芝 RNA 的提取 | 第73页 |
| ·目的基因引物的设计和合成 | 第73页 |
| ·cDNA 第一链合成 | 第73页 |
| ·目的基因的普通 PCR 扩增 | 第73页 |
| ·目的基因的 qRT-PCR 扩增 | 第73-74页 |
| ·胶回收目的片段 | 第74页 |
| ·胶回收片段与 T-载体的连接 | 第74页 |
| ·质粒的转化 | 第74页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第74页 |
| ·质粒提取 | 第74页 |
| ·测序 | 第74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-79页 |
| ·ABTS 法测定漆酶酶活 | 第74-75页 |
| ·目的基因引物的特异性分析 | 第75-77页 |
| ·目的基因片段的普通 PCR 扩增 | 第75页 |
| ·目的基因片段的测序 | 第75-76页 |
| ·融解曲线 | 第76-77页 |
| ·目的基因表达的 qRT-PCR 分析 | 第77-79页 |
| ·目的基因标准曲线的制备 | 第77-78页 |
| ·目的基因在不同营养培养条件中的转录水平分析 | 第78-79页 |
| 3 小结与讨论 | 第79-81页 |
| 参考文献 | 第81-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
