| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一部分 文献综述 | 第10-15页 |
| 1 葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的结构及分布 | 第10-11页 |
| 2 单羧酸转运蛋白1、4(MCT1、4)的结构及分布 | 第11-12页 |
| 3 能量代谢中GLUT4、MCT1、MCT4 的相关研究 | 第12-15页 |
| ·MCT1、MCT4 功能研究 | 第12-13页 |
| ·缺氧条件下GLUT4、MCT1、MCT4 基因表达研究 | 第13页 |
| ·运动状态下GLUT4、MCT1、MCT4 基因表达研究 | 第13-14页 |
| ·GLUT4、MCT1、MCT4 基因表达发育性变化研究 | 第14-15页 |
| 第二部分 实验研究 | 第15-55页 |
| 第一章 九龙牦牛 GLUT4、MCT1、MCT4 基因的克隆及序列分析 | 第15-32页 |
| 1 实验材料 | 第15-16页 |
| ·实验动物 | 第15页 |
| ·实验试剂 | 第15页 |
| ·主要仪器 | 第15-16页 |
| ·生物学应用软件 | 第16页 |
| 2 实验方法 | 第16-18页 |
| ·总RNA 的提取 | 第16页 |
| ·反转录cDNA | 第16-17页 |
| ·PCR 扩增GLUT4、MCT1、MCT4 基因 | 第17页 |
| ·PCR 产物胶回收 | 第17页 |
| ·胶回收产物的T 载体连接 | 第17-18页 |
| ·转化 | 第18页 |
| ·挑菌 | 第18页 |
| ·测序 | 第18页 |
| 3 实验结果 | 第18-30页 |
| ·总RNA 的提取结果 | 第18-19页 |
| ·GLUT4、MCT1、MCT4 基因RT-PCR 扩增结果 | 第19-20页 |
| ·GLUT4、MCT1、MCT4 基因与载体的重组及重组子的鉴定 | 第20页 |
| ·GLUT4、MCT1、MCT4 重组质粒测序 | 第20页 |
| ·九龙牦牛 GLUT4 基因核苷酸序列及氨基酸序列与普通牛比对 | 第20-24页 |
| ·九龙牦牛MCT1 基因核苷酸序列及氨基酸序列与普通牛比对 | 第24-27页 |
| ·九龙牦牛MCT4 基因核苷酸序列及氨基酸序列与普通牛比对 | 第27-30页 |
| 4 讨论 | 第30-32页 |
| 第二章 九龙牦牛 GLUT4、MCT1、MCT4 基因mRNA 水平的表达研究 | 第32-42页 |
| 1 实验材料 | 第32-33页 |
| ·实验动物 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-35页 |
| ·RNA 提取和反转录 | 第33页 |
| ·荧光定量引物设计 | 第33页 |
| ·荧光定量PCR 的反应体系 | 第33-34页 |
| ·荧光定量PCR 扩增程序的设定 | 第34页 |
| ·标准曲线的建立 | 第34页 |
| ·相对定量计算方法的确定 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-40页 |
| ·GLUT4、MCT1、MCT4、GAPDH 基因标准曲线的建立 | 第35-37页 |
| ·牦牛肌肉GLUT4、MCT1、MCT4 基因的发育谱 | 第37-38页 |
| ·牦牛与黄牛肌肉GLUT4、MCT1、MCT4 基因表达比较 | 第38-39页 |
| ·背最长肌与股四头肌GLUT4、MCT1、MCT4基因mRNA水平比较 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| ·GLUT4、MCT1、MCT4 基因表达的发育谱 | 第40页 |
| ·GLUT4、MCT1、MCT4 基因表达的牛种间比较 | 第40-41页 |
| ·背最长肌、股四头肌GLUT4、MCT1、MCT4 基因表达比较 | 第41-42页 |
| 第三章 九龙牦牛 LDH-1 基因遗传变异体的克隆测序分析 | 第42-47页 |
| 1 实验材料 | 第42页 |
| 2 实验方法 | 第42-43页 |
| ·PCR 扩增LDH-1 基因 | 第42-43页 |
| 3 实验结果 | 第43-46页 |
| ·LDH-1 的 RT-PCR 扩增结果 | 第43页 |
| ·LDH-1 目标片段与载体的重组及重组子的鉴定 | 第43-44页 |
| ·LDH-1 基因重组质粒测序 | 第44页 |
| ·九龙牦牛 LDH-1 基因遗传变异体核苷酸序列的比对 | 第44-45页 |
| ·九龙牦牛LDH-1 基因遗传变异体氨基酸序列的比对 | 第45-46页 |
| ·九龙牦牛LDH-1 基因遗传变异体分子量及等电点预测 | 第46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 第四章 九龙牦牛LDH-1基因遗传变异体的多态性研究及与同工酶谱的关联 | 第47-55页 |
| 1 实验材料 | 第47-48页 |
| ·实验动物 | 第47页 |
| ·实验试剂 | 第47页 |
| ·主要仪器 | 第47-48页 |
| 2 实验方法 | 第48-50页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第48页 |
| ·LDHB-F 的PCR 扩增 | 第48页 |
| ·LDHB-F 酶切 | 第48页 |
| ·基因型频率和等位基因频率计算 | 第48-49页 |
| ·遗传平衡吻合度检验 | 第49页 |
| ·同工酶样品处理 | 第49页 |
| ·同工酶电泳相关试剂配制 | 第49-50页 |
| ·同工酶电泳实验步骤 | 第50页 |
| 3 实验结果 | 第50-53页 |
| ·牦牛肌肉组织DNA 提取结果 | 第50页 |
| ·LDHB-F 的PCR 扩增结果 | 第50-51页 |
| ·LDHB-F 基因的酶切检测结果 | 第51页 |
| ·LDHB-F 基因的等位基因频率及基因型频率分析 | 第51-52页 |
| ·LDHB-F 基因多态位点的Hardy-Weinberg 平衡检测 | 第52页 |
| ·LDH 同工酶电泳结果 | 第52-53页 |
| ·LDHB-F 基因多态性与LDH 同工酶电泳结果关联 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-59页 |
| 致谢 | 第59-61页 |
| 附录1:基因克隆相关试剂的配制方法 | 第61-62页 |
| 附录2: MCT1、 MCT4、GAPDH 基因扩增曲线及标准曲线 | 第62-63页 |
