| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一章 弓形虫P24基因敲除转染质粒PGB/P5-P3的构建及鉴定 | 第13-25页 |
| ·材料与方法 | 第14-19页 |
| ·实验试剂 | 第14页 |
| ·实验仪器 | 第14-15页 |
| ·菌株、弓形虫虫株、质粒 | 第15页 |
| ·培养基及主要试剂配制 | 第15页 |
| ·弓形虫TgP24基因分析及引物设计 | 第15-16页 |
| ·PCR扩增TgP24的5'非翻译区片段(P24 5'UTR)和3'非翻译区片段(P24 3'UTR) | 第16页 |
| ·P24 5'UTR和P24 3'UTR亚克隆入pCR2.1-TOPO TA载体 | 第16页 |
| ·构建质粒pGB-P5(GRA2/Ble-P24 5′UTR) | 第16-17页 |
| ·构建转染质粒pGB/P5-P3(GRA2/Ble-P24 5'UTR-P24 3'UTR) | 第17-18页 |
| ·重组质粒pGB/P5-P3的转化 | 第18页 |
| ·重组子质粒的提取 | 第18-19页 |
| ·结果 | 第19-23页 |
| ·P24 5′UTR和P243′UTR的PCR扩增 | 第19页 |
| ·P245′UTR和P243′LLTR亚克隆入pCR2.1-TOPO TA载体的双酶切鉴定 | 第19-20页 |
| ·pGB-P5的构建 | 第20-21页 |
| ·转染质粒pGB/P5-P3的构建 | 第21页 |
| ·质粒重组子测序结果 | 第21-23页 |
| ·讨论 | 第23-25页 |
| 第二章 弓形虫P24基因缺陷型虫株筛选条件的建立 | 第25-37页 |
| ·材料和方法 | 第25-31页 |
| ·弓形虫虫株和细胞株 | 第25页 |
| ·实验动物 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器 | 第26页 |
| ·溶液和培养基的配制 | 第26-27页 |
| ·弓形虫RH株速殖子的动物接种 | 第27页 |
| ·弓形虫RH株速殖子的收集与纯化 | 第27页 |
| ·L929、NIH-3T3和HFF三种成纤维细胞的培养 | 第27-28页 |
| ·无内毒素质粒的提取 | 第28-29页 |
| ·Tg P24基因敲除质粒转染前的准备和处理 | 第29页 |
| ·不同电穿孔法转染弓形虫RH株 | 第29-30页 |
| ·单独细胞内药物筛选和结合细胞外药物低温处理转染虫株的观察比较 | 第30页 |
| ·敲除质粒转染虫株在不同细胞中的药物筛选中的观察比较 | 第30-31页 |
| ·结果 | 第31-33页 |
| ·弓形虫RH株速殖子的收集和纯化 | 第31页 |
| ·L929成纤维细胞的培养及弓形虫的体外培养 | 第31-32页 |
| ·不同电穿孔方法转染后弓形虫活力的比较 | 第32页 |
| ·单独细胞内药物筛选和结合细胞外药物低温处理转染虫株的观察比较 | 第32页 |
| ·基因敲除质粒转染虫株在不同细胞中药物筛选的比较 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-37页 |
| 第三章 弓形虫P24基因缺陷型虫株的建立及鉴定分析 | 第37-47页 |
| ·材料和方法 | 第37-43页 |
| ·弓形虫虫株和细胞株 | 第37页 |
| ·实验动物 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·主要试剂配制 | 第39-40页 |
| ·优化的高电压转染方法导入基因敲除质粒于弓形虫RH速殖子 | 第40页 |
| ·TgP24基因敲除质粒电转染虫株的筛选及获得 | 第40页 |
| ·RT-PCR检测筛选后的虫株基因P24转录的mRNA | 第40-41页 |
| ·蛋白表达产物的Western-blot分析 | 第41-43页 |
| ·获得的基因缺陷型虫株动物毒力实验观察 | 第43页 |
| ·统计学处理 | 第43页 |
| ·结果 | 第43-46页 |
| ·弓形虫P24基因缺陷型虫株的获得 | 第43页 |
| ·RT-PCR结果 | 第43-44页 |
| ·Western-blot结果 | 第44页 |
| ·L929细胞筛选组获得基因缺陷型虫株的动物毒力实验观察 | 第44-46页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 综述 | 第51-64页 |
| 攻读学位期间发表的主要论文 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
