| 中文摘要 | 第1-10页 |
| 英文摘要 | 第10-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-28页 |
| 1 关于miRNA | 第13-23页 |
| ·miRNA的概念、生物学特性 | 第13-14页 |
| ·miRNA的发生 | 第14-15页 |
| ·miRNA的作用机制 | 第15-17页 |
| ·miRNA指导靶mRNA的切割 | 第16页 |
| ·miRNA指导抑制mRNA的翻译 | 第16-17页 |
| ·miRNA与siRNA | 第17-18页 |
| ·植物miRNA | 第18-20页 |
| ·植物miRNA特征 | 第18页 |
| ·植物miRNA的功能 | 第18-20页 |
| ·植物miRNA的研究方法 | 第20-23页 |
| ·识别miRNA的途径 | 第20-21页 |
| ·miRNA的表达分析方法 | 第21-22页 |
| ·miRNA功能分析方法 | 第22-23页 |
| 2 植物花粉的发育与玉米细胞质雄性不育 | 第23-27页 |
| ·植物花粉发育过程 | 第23-24页 |
| ·关于玉米细胞质雄性不育 | 第24-27页 |
| ·玉米CMS的分类 | 第24页 |
| ·植物细胞质雄性不育的生理生化特征 | 第24-25页 |
| ·植物细胞质雄性不育的分子机制 | 第25-27页 |
| 3 本研究的目的意义 | 第27-28页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第28-48页 |
| 1 实验材料 | 第28-29页 |
| ·玉米供试材料 | 第28页 |
| ·克隆载体及宿主菌 | 第28页 |
| ·主要试剂 | 第28-29页 |
| ·试剂盒 | 第28页 |
| ·酶类以及相关试剂 | 第28-29页 |
| ·试验主要仪器设备 | 第29页 |
| 2 实验方法 | 第29-48页 |
| ·花药总RNA提取 | 第29-30页 |
| ·花药小分子RNA分离 | 第30-31页 |
| ·miRNA的克隆 | 第31-40页 |
| ·小分子RNA 5′去磷酸化处理 | 第31-33页 |
| ·小分子RNA 3′接头的连接 | 第33页 |
| ·小分子RNA 3′MAGNOTEX-SA的吸附 | 第33-34页 |
| ·小分子RNA 5′末端磷酸化 | 第34-35页 |
| ·小分子RNA的反转录 | 第35-36页 |
| ·PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·PCR片段的纯化及切胶回收 | 第37-39页 |
| ·PCR片段的连接 | 第39页 |
| ·CaCl_2法制备大肠杆菌DH5α感受态 | 第39-40页 |
| ·热激法转化 | 第40页 |
| ·阳性克隆的PCR检测及测序 | 第40-42页 |
| ·序列的生物信息学分析 | 第42-43页 |
| ·miRNA数据库比对 | 第42页 |
| ·前体发夹结构预测 | 第42-43页 |
| ·候选miRNA的验证及表达分析 | 第43-47页 |
| ·miRNA候选靶基因表达差异分析 | 第47-48页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第48-73页 |
| 1 花药总RNA与小分子RNA提取结果 | 第48页 |
| 2 小分子RNA两端连接接头、逆转录PCR扩增结果 | 第48-49页 |
| 3 回收产物后续操作 | 第49-51页 |
| 4 新发现的玉米miRNA | 第51-55页 |
| 5 miRNA保守性鉴定 | 第55-56页 |
| 6 miRNA真实性验证 | 第56-58页 |
| 7 miRNA靶基因预测 | 第58-62页 |
| 8 miRNA在花药中的相对表达量 | 第62-70页 |
| ·5s rRNA和miRNA加尾产物扩增溶解曲线 | 第62-63页 |
| ·荧光定量的标准曲线 | 第63-65页 |
| ·miRNA在花药中的相对表达量 | 第65-70页 |
| ·miR-1的相对表达量 | 第66页 |
| ·miR-2的相对表达量 | 第66页 |
| ·miR-3的相对表达量 | 第66-67页 |
| ·miR-4的相对表达量 | 第67页 |
| ·miR-5的相对表达量 | 第67-68页 |
| ·miR-6的相对表达量 | 第68页 |
| ·miR-7的相对表达量 | 第68页 |
| ·miR-8的相对表达量 | 第68-69页 |
| ·miR-9的相对表达量 | 第69页 |
| ·miR-10的相对表达量 | 第69-70页 |
| 9 MADS-box和Zein-alpha在N48-2和C48-2中的表达情况 | 第70-73页 |
| ·MADS-box他Zein-alpha的RT-PCR检测 | 第70-71页 |
| ·溶解曲线及标准曲线分析 | 第71-72页 |
| ·MADS-box和Zein-alpha的定量分析 | 第72-73页 |
| 第四部分 讨论 | 第73-85页 |
| 1 对玉米花药miRNA鉴定的意义 | 第73页 |
| 2 miRNA的生物信息学鉴定与克隆鉴定 | 第73-74页 |
| 3 本研究所构建的小分子RNA文库 | 第74页 |
| 4 玉米花药中鉴定的miRNA | 第74-75页 |
| 5 miRNA的靶基因 | 第75-82页 |
| ·MADS-box与雄性不育 | 第75-76页 |
| ·α-醇溶蛋白与花粉败育 | 第76-77页 |
| ·NADH脱氢酶与花粉败育 | 第77-78页 |
| ·细胞色素P450单加氧酶与花粉败育 | 第78-79页 |
| ·二氢黄铜醇-4-还原酶与花粉败育 | 第79-80页 |
| ·拟HSP33蛋白与花粉发育 | 第80-81页 |
| ·其它转录因子与花粉败育 | 第81-82页 |
| 6 miRNA的调控与雄性败育时期 | 第82页 |
| 7 由miRNA调控的雄性败育机理探讨 | 第82-83页 |
| 8 展望 | 第83-85页 |
| 第五部分 结论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-98页 |
| 致谢 | 第98页 |
