| 缩略语表 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-17页 |
| ABSTRACT | 第17-25页 |
| 前言 | 第25-28页 |
| 文献回顾 | 第28-54页 |
| 1 哺乳动物工程细胞大规模培养技术和发展趋势 | 第28-43页 |
| ·细胞系 | 第29-30页 |
| ·培养方式 | 第30-32页 |
| ·凋亡 | 第32-34页 |
| ·国内大规模动物细胞培养的技术现状 | 第34-35页 |
| ·无载体固定化技术和细胞团生长 | 第35-43页 |
| ·无载体固定化培养 | 第35-36页 |
| ·细胞团存活方式 | 第36-39页 |
| ·大规模瞬时转染系统 | 第39-43页 |
| 2 失巢凋亡和抗性细胞亚群获得 | 第43-50页 |
| ·细胞失巢凋亡 | 第44页 |
| ·细胞失巢凋亡的信号调节 | 第44-45页 |
| ·细胞失巢凋亡抗性 | 第45-48页 |
| ·哺乳动物工程细胞培养过程中的失巢凋亡 | 第48页 |
| ·细胞骨架在失巢抗性中作用 | 第48-50页 |
| 3 CD147 分子 | 第50-54页 |
| ·HAb18G/CD147 | 第50页 |
| ·CD147 蛋白结构 | 第50页 |
| ·与CD147 分子相互作用的蛋白 | 第50-51页 |
| ·CD147 功能 | 第51-52页 |
| ·CD147 分子和细胞骨架 | 第52-54页 |
| 第一部分 失巢凋亡抗性可贴壁细胞亚群（HEK293ar）的获得 | 第54-76页 |
| 1 材料和仪器 | 第55-60页 |
| ·细胞株 | 第55页 |
| ·主要实验器材 | 第55-56页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-60页 |
| 2 实验结果 | 第60-74页 |
| ·HEK293 失巢模型的建立和优化 | 第60-61页 |
| ·失巢凋亡发生 | 第61-67页 |
| ·悬浮适应（失巢凋亡抗性）可贴壁细胞亚群的获得 | 第67-74页 |
| 讨论 | 第74-76页 |
| 第二部分 悬浮适应可贴壁细胞亚群 HEK293ar 的 应用 | 第76-86页 |
| 1 材料和方法 | 第76-79页 |
| ·主要仪器和材料 | 第76页 |
| ·主要材料 | 第76-77页 |
| ·实验方法 | 第77-79页 |
| 2 无载体固定化培养可行性研究 | 第79-80页 |
| ·长期悬浮培养增殖特性研究 | 第79页 |
| ·无载体固定化细胞反复利用研究 | 第79-80页 |
| 3 实验结果 | 第80-84页 |
| ·HEK293ar贴壁转染后悬浮生产EGFP蛋白 | 第80页 |
| ·HEK293ar细胞悬浮生产蛋白的时间变化规律 | 第80-81页 |
| ·PEI（聚乙烯亚胺）高效转染HEK293ar方法体系的建立 | 第81页 |
| ·双阶段瞬时转染生产EGFP蛋白策略 | 第81-83页 |
| ·HEK293ar 细胞瞬时转染 PHL-18 生产 CHAb18 抗体 | 第83页 |
| ·无载体固定化细胞培养增殖特性和可行性研究 | 第83-84页 |
| 讨论 | 第84-86页 |
| 第三部分 HAb18G/CD147 黏附分子在失巢凋亡抗 性的作用 | 第86-106页 |
| 1 材料和方法 | 第86-89页 |
| ·主要仪器 | 第86-87页 |
| ·主要试剂 | 第87-88页 |
| ·主要缓冲液 | 第88-89页 |
| 2 实验方法 | 第89-94页 |
| ·脂质体介导转染siRNA | 第89-90页 |
| ·Western blot 实验检测转染 24hr 时 HAb18G siRNA 和 E-cadherin siRNA 分别对 HAb18G/CD147 和 E-cadherin 的抑制效果 | 第90-91页 |
| ·细胞免疫荧光法检测 HAb18G siRNA 和 E-cadheirn siRNA 分别对 HAb18G/CD147 的抑制效果 | 第91-92页 |
| ·信号通路抑制实验 | 第92-93页 |
| ·细胞连接干扰实验 | 第93-94页 |
| ·用流式细胞仪检测 HAb18G/CD147 的表达 | 第94页 |
| ·数据处理 | 第94页 |
| 3 实验结果 | 第94-103页 |
| ·流式细胞仪检测 HEK293ar 表达 HAb18G/CD147 上调 | 第94-95页 |
| ·Western blot 检测 HAb18G/CD147 在 HEK293ar 表达上调 | 第95页 |
| ·HAb18G/CD147 表达定位于 HEK293ar 细胞团中的细胞间连接处 | 第95-96页 |
| ·干涉 HAb18G/CD147 表达导致 HEK293ar 凋亡、细胞间连接破坏 | 第96-97页 |
| ·下调E-cadherin导致HEK293ar凋亡和细胞间连接破坏 | 第97-98页 |
| ·HAb18G/CD147和E-cadherin分子在HEK293ar失巢凋亡抗性中的联系 | 第98-101页 |
| ·HAb18G/CD147 黏附分子通过PI3-K信号通路调节失巢凋亡抗性 | 第101-103页 |
| 讨论 | 第103-106页 |
| 第四部分 HAb18G/CD147和失巢凋亡抗性细胞团 骨架之间的关系研究 | 第106-119页 |
| 1 材料和方法 | 第107页 |
| ·主要仪器 | 第107页 |
| ·主要试剂 | 第107页 |
| ·主要缓冲液 | 第107页 |
| 2 实验方法 | 第107-111页 |
| ·脂质体介导转染siRNA | 第107页 |
| ·细胞形态观察和凋亡检测 | 第107-108页 |
| ·Western blot检测Plectin表达 | 第108-109页 |
| ·细胞免疫荧光法检测HEK293ar细胞骨架的变化 | 第109页 |
| ·细胞免疫荧光法检测 HAb18G/CD147 和 plectin 表达共定位 | 第109-110页 |
| ·利用鬼笔环肽染色观察F-actin骨架 | 第110-111页 |
| ·实验结果处理 | 第111页 |
| 3 实验结果 | 第111-116页 |
| ·失巢抗性细胞株在失巢条件下的细胞间连接加强 | 第111-112页 |
| ·细胞失巢培养条件下的微纤维丝细胞骨架 | 第112页 |
| ·免疫荧光法检测失巢凋亡抗性细胞的细胞团的细胞骨架 | 第112-114页 |
| ·western blot检测骨架蛋白水平表达变化 | 第114页 |
| ·干涉HAb18G/CD147 对细胞骨架的影响 | 第114页 |
| ·HAb18G/CD147 和plectin在HEK293ar细胞悬浮培养时的相互作用 | 第114-116页 |
| 讨论 | 第116-119页 |
| 小结 | 第119-120页 |
| 附录 | 第120-121页 |
| 个人简历和研究成果 | 第121-122页 |
| 参考文献 | 第122-137页 |
| 致谢 | 第137页 |
