摘要 | 第1-14页 |
ABSTRACT | 第14-24页 |
符号说明 | 第24-25页 |
主要试剂 | 第25-26页 |
主要仪器 | 第26-28页 |
第一章 综述 | 第28-53页 |
1 历史回顾 | 第28-30页 |
·诺瓦克病毒(Norwalk Virus)的发现 | 第28-30页 |
2 分子生物学 | 第30页 |
3 分类学 | 第30-31页 |
4 细胞培养 | 第31页 |
5 理化特征 | 第31-32页 |
6 病毒粒子结构 | 第32-33页 |
7 基因组结构 | 第33-34页 |
8 病毒蛋白 | 第34-35页 |
·结构蛋白 | 第34页 |
·非结构蛋白 | 第34-35页 |
·ORF1 的蛋白酶解加工 | 第34-35页 |
·非结构蛋白结构与功能 | 第35页 |
9 复制模型 | 第35-36页 |
10 遗传分类与重组 | 第36-37页 |
·诺如病毒遗传分类 | 第36页 |
·札幌病毒遗传分类 | 第36-37页 |
11 基因重组 | 第37-38页 |
12 检测方法 | 第38-40页 |
·电镜技术(Electron microscopy) | 第39页 |
·RT-PCR | 第39页 |
·免疫测定 | 第39-40页 |
·血清学检测 | 第40页 |
13 流行病学 | 第40-44页 |
14 环境中的杯状病毒 | 第44-45页 |
15 致病机理及组织嗜性 | 第45-46页 |
16 跨种间感染风险 | 第46-47页 |
17 受体研究 | 第47-50页 |
·研究进展 | 第47-48页 |
·受体的研究方法和意义 | 第48-50页 |
18 问题与展望 | 第50-53页 |
·分子流行病学与基因重组 | 第50-51页 |
·致病机理与动物模型 | 第51-52页 |
·SaV 的受体研究 | 第52-53页 |
第二章 杯状病毒的分子流行病学研究 | 第53-103页 |
第一节 中国大陆首次发现猪札幌病毒疑导致仔猪腹泻 | 第53-60页 |
1 材料与方法 | 第53-58页 |
·样品来源 | 第53-54页 |
·实验动物 | 第54页 |
·HEV RNA 的检测 | 第54-57页 |
·动物感染实验 | 第57-58页 |
2 实验结果 | 第58-59页 |
·病毒感染情况 | 第58页 |
·序列进化分析 | 第58-59页 |
·动物回归实验 | 第59页 |
3 讨论 | 第59-60页 |
第二节 华东地区猪杯状病毒分子流行病学研究 | 第60-68页 |
1 材料与方法 | 第60-62页 |
·样品采集 | 第60-61页 |
·实验方法 | 第61-62页 |
·序列分析 | 第62页 |
·统计分析 | 第62页 |
2 实验结果 | 第62-66页 |
·SaV 和NoV 检测结果 | 第62-63页 |
·统计分析 | 第63-64页 |
·进化分析 | 第64-66页 |
3 讨论 | 第66-68页 |
第三节 贵州地区猪杯状病毒和戊型肝炎病毒分子流行病学研究 | 第68-76页 |
1 材料与方法 | 第68-71页 |
·样品来源及其处理方法 | 第68-69页 |
·HEV、NoV 和SaV RNA 的检测 | 第69-71页 |
·序列分析 | 第71页 |
·统计分析 | 第71页 |
2 实验结果 | 第71-74页 |
·检测结果 | 第71-72页 |
·序列分析 | 第72-74页 |
3 讨论 | 第74-76页 |
第四节 中国猪SaV 代表毒株全基因组分析 | 第76-88页 |
1 材料与方法 | 第76-81页 |
·样品采集 | 第76-77页 |
·全基因组克隆 | 第77-80页 |
·序列分析 | 第80-81页 |
·ORF23′末端部分序列分析 | 第81页 |
2 结果 | 第81-87页 |
·基因组结构 | 第81-87页 |
3 讨论 | 第87-88页 |
第五节 上海地区门诊儿童的人杯状病毒感染情况调查及基因重组分析 | 第88-103页 |
1 材料与方法 | 第88-95页 |
·样品采集 | 第88页 |
·实验方法 | 第88-94页 |
·序列分析 | 第94-95页 |
2 结果 | 第95-101页 |
·检测结果 | 第95页 |
·序列分析 | 第95-96页 |
·全基因组分析 | 第96-97页 |
·重组分析 | 第97-101页 |
3 讨论 | 第101-103页 |
第三章 猪SaV 与宿主互作机制研究 | 第103-142页 |
第一节 猪SaV 小型猪感染模型的建立 | 第103-119页 |
1 材料 | 第104页 |
·实验动物 | 第104页 |
·病毒 | 第104页 |
·抗体 | 第104页 |
2 方法 | 第104-107页 |
·动物分组 | 第104页 |
·病毒接种 | 第104-105页 |
·病毒接种后的临床症状观察 | 第105页 |
·间接免疫荧光 | 第105-106页 |
·病理切片 | 第106页 |
·透射电镜观察 | 第106-107页 |
·RT-PCR 检测各组织以及血清、粪便的病毒RNA | 第107页 |
·血常规检测 | 第107页 |
3 结果 | 第107-117页 |
·临床症状 | 第107-108页 |
·血常规 | 第108-110页 |
·剖检病理变化 | 第110-112页 |
·组织切片观察 | 第112-114页 |
·免疫荧光 | 第114页 |
·扫描电镜 | 第114-116页 |
·透射电镜 | 第116-117页 |
·各组织以及血清、盲肠内容物的病毒RNA | 第117页 |
4 讨论 | 第117-119页 |
第二节 连接黏附分子1(JAM-1)作为猪SaV 受体的可能性研究 | 第119-125页 |
1 材料与方法 | 第119-122页 |
·主要试剂及材料 | 第119-120页 |
·实验方法 | 第120-122页 |
2 结果 | 第122-123页 |
·猫JAM-1 多抗与LLC-PK 细胞间的免疫交叉反应 | 第122页 |
·猫JAM-1 多抗阻断病毒感染效果 | 第122-123页 |
3 讨论 | 第123-125页 |
第三节 VOPBA 和Co-IP 法筛选猪SaV 候选受体及MHC-1 与病毒结合的验证 | 第125-142页 |
1 材料与方法 | 第125-131页 |
·主要试剂及材料 | 第125-126页 |
·方法 | 第126-131页 |
2 实验结果 | 第131-140页 |
·VOPBA 及蛋白质鉴定结果 | 第131-134页 |
·候选蛋白分析 | 第134-136页 |
·CO-IP 筛选结果 | 第136-139页 |
·MHC-I 与Cowden 毒株的Co-IP 结果 | 第139-140页 |
3 讨论 | 第140-142页 |
第四章 人NoV 病毒GII-4、GII-12 样颗粒的表达 | 第142-161页 |
1 材料与方法 | 第143-155页 |
·毒株、质粒与菌株 | 第143页 |
·入门重组载体的构建 | 第143-155页 |
2 结果 | 第155-159页 |
·入门重组载体的构建 | 第155-156页 |
·VP1(194)-EGFP 感染Sf9 细胞的荧光观察 | 第156-157页 |
·Western-blot 检测蛋白的表达 | 第157页 |
·High-Titer Viral Stock | 第157-158页 |
·VLPs 的表达 | 第158页 |
·VLPs 的IEM 观察 | 第158-159页 |
3 讨论 | 第159-161页 |
全文结论及创新点 | 第161-163页 |
参考文献 | 第163-180页 |
攻读博士学位期间发表和待发表的论文及所申请专利 | 第180-182页 |
致谢 | 第182-185页 |
附件 | 第185页 |