| 中文摘要 | 第1-22页 |
| 英文摘要 | 第22-27页 |
| 符号说明 | 第27-28页 |
| 绪论 | 第28-39页 |
| 1.引言 | 第28-30页 |
| 2.基因载体研究概况 | 第30-33页 |
| 3.本课题的设想和思路 | 第33-39页 |
| 第一部分 PicoGreen荧光分光光度法测定载基因纳米粒的包封率 | 第39-49页 |
| 一、实验材料 | 第39-40页 |
| 1 试剂与药品 | 第39-40页 |
| 2 主要仪器 | 第40页 |
| 二、实验方法 | 第40-42页 |
| 1 质粒DNA的性质评价 | 第40页 |
| ·质粒DNA的酶切鉴定 | 第40页 |
| ·质粒DNA的含量和纯度分析 | 第40页 |
| 2 阳离子载基因PLA-PEG纳米粒的制备 | 第40-41页 |
| 3 DNA含量测定方法的建立 | 第41-42页 |
| ·PicoGreen工作液配制 | 第41页 |
| ·激发、发射波长的选择 | 第41页 |
| ·标准曲线的建立 | 第41页 |
| ·放置时间的影响 | 第41页 |
| ·放置温度的影响 | 第41-42页 |
| ·干扰物质的影响 | 第42页 |
| ·精密度试验 | 第42页 |
| ·回收率试验 | 第42页 |
| 4 载基因纳米粒包封率的测定 | 第42页 |
| 三、实验结果 | 第42-48页 |
| 1 酶切鉴定 | 第42-43页 |
| 2 产量和纯度分析 | 第43-44页 |
| 3 DNA含量测定方法的考查结果 | 第44-47页 |
| ·激发、发射波长的确定 | 第44页 |
| ·标准曲线的建立 | 第44页 |
| ·放置时间的影响 | 第44-45页 |
| ·放置温度的影响 | 第45页 |
| ·干扰物质的影响 | 第45-46页 |
| ·精密度试验 | 第46-47页 |
| ·回收率试验 | 第47页 |
| 4 纳米粒的包封率 | 第47-48页 |
| 四、讨论 | 第48-49页 |
| 第二部分 阴离子包封型载基因PLGA纳米粒的研究 | 第49-64页 |
| 一、实验材料 | 第50-51页 |
| 1 试剂与药品 | 第50页 |
| 2 主要仪器 | 第50-51页 |
| 二、实验方法 | 第51-54页 |
| 1 载基因PLGA纳米粒的制备 | 第51页 |
| ·改良的纳米粒沉淀法 | 第51页 |
| ·复乳化溶剂挥发法 | 第51页 |
| 2 载基因纳米粒的包封率的测定 | 第51-52页 |
| 3 载基因PLGA纳米粒的形态、平均粒径和zeta电位 | 第52页 |
| 4 载基因PLGA纳米粒中的DNA结构完整性分析 | 第52页 |
| ·琼脂糖凝胶的制备及使用方法 | 第52页 |
| ·DNA结构完整性分析 | 第52页 |
| 5 载基因PLGA纳米粒的抗核酸酶解能力考察 | 第52-53页 |
| 6 载基因PLGA纳米粒的体外释放研究 | 第53页 |
| 7 载基因PLGA纳米粒的细胞毒性试验 | 第53-54页 |
| 8 统计学分析 | 第54页 |
| 9 体外细胞转染试验 | 第54页 |
| 三、实验结果 | 第54-60页 |
| 1 载基因纳米粒的理化性质结果 | 第54-56页 |
| 2 包封于纳米粒中DNA的结构完整性 | 第56-57页 |
| 3 抗核酸酶解能力 | 第57-58页 |
| 4 体外释放试验 | 第58-59页 |
| 5 PLGA纳米粒的细胞毒性评价 | 第59-60页 |
| 6 纳米粒的体外转染试验 | 第60页 |
| 四、讨论 | 第60-64页 |
| 第三部分 阳离子载基因PLGA纳米粒的研究 | 第64-81页 |
| 一、实验材料 | 第65-66页 |
| 1 试剂与药品 | 第65页 |
| 2 主要仪器 | 第65-66页 |
| 二、实验方法 | 第66-69页 |
| 1 空白阳离子PLGA纳米粒的制备 | 第66页 |
| 2 CTAB-NPs的形态、粒径和表面电位的测定 | 第66页 |
| 3 纳米粒最优处方的筛选 | 第66-67页 |
| ·单因素考察及预试验 | 第66页 |
| ·正交设计实验 | 第66页 |
| ·重现性考察 | 第66-67页 |
| 4 阳离子载基因PLGA纳米粒的制备、最优比的考察 | 第67页 |
| ·阳离子载基因PLGA纳米粒的制备 | 第67页 |
| ·DNA结合率的测定 | 第67页 |
| ·CTAB-NPs与DNA最优比的考察 | 第67页 |
| ·CTAB-NPs与DNA孵育时间的影响 | 第67页 |
| 5 DNA-CTAB-NPs形态、粒径和表面电位的测定 | 第67页 |
| 6 琼脂糖凝胶电泳阻滞试验 | 第67页 |
| 7 DNA-CTAB-NPs抗核酸酶能力考察 | 第67-68页 |
| ·DNA-CTAB-NPs中DNA提取方法的选择 | 第67-68页 |
| ·孵育时间的影响 | 第68页 |
| ·核酸酶浓度的影响 | 第68页 |
| 8 DNA-CTAB-NPs的体外释放试验 | 第68-69页 |
| 9 DNA-CTAB-NPs的细胞毒性试验 | 第69页 |
| 10 DNA-CTAB-NPs体外转染试验 | 第69页 |
| 三、实验结果 | 第69-79页 |
| 1 CTAB-NPs与DNA-CTAB-NPs的形态、粒径、表面电位 | 第69-70页 |
| 2 CTAB-NPs处方考察结果 | 第70-72页 |
| ·单因素考察结果 | 第70-71页 |
| ·正交设计结果 | 第71-72页 |
| ·重现性考察结果 | 第72页 |
| 3 CTAB-NPs与DNA结合最优比考察 | 第72-73页 |
| ·NPs/DNA对DNA结合率的影响 | 第72-73页 |
| ·孵育时间对DNA结合率的影响 | 第73页 |
| 4 琼脂糖凝胶电泳阻滞分析 | 第73-74页 |
| 5 DNA-CTAB-NPs抗核酸酶解能力考察 | 第74-77页 |
| ·DNA提取方法选择结果 | 第74-75页 |
| ·酶解反应孵育时间的影响 | 第75-76页 |
| ·不同核酸酶浓度的影响 | 第76-77页 |
| 6 体外释放结果 | 第77页 |
| 7 DNA-CTAB-NPs的细胞毒性评价结果 | 第77-78页 |
| 8 DNA-CTAB-NPs的体外转染试验结果 | 第78-79页 |
| 四、讨论 | 第79-81页 |
| 第四部分 阳离子载基因PLA-PEG纳米粒的研究 | 第81-103页 |
| 一、实验材料 | 第81-82页 |
| 1 试剂与药品 | 第81-82页 |
| 2 主要仪器 | 第82页 |
| 二、实验方法 | 第82-87页 |
| 1 阳离子PLA-PEG纳米粒的制备与处方优化 | 第82页 |
| 2 PLA-PEG-NPs最优处方的筛选 | 第82-84页 |
| ·单因素考察 | 第82-83页 |
| ·正交设计 | 第83-84页 |
| ·重现性考察 | 第84页 |
| 3 阳离子载基因PLA-PEG纳米粒的制备与优化 | 第84页 |
| ·载基因纳米粒的制备 | 第84页 |
| ·DNA结合率的测定 | 第84页 |
| ·PLA-PEG-NPs与DNA最优比的考察 | 第84页 |
| 4 纳米粒的形态、粒径和表面电位的测定 | 第84页 |
| 5 DNA-PLA-PEG-NPs抗核酸酶能力考察 | 第84-85页 |
| 6 DNA-PLA-PEG-NPs血浆稳定性考察 | 第85页 |
| 7 DNA-PLA-PEG-NPs的体外释放试验 | 第85-86页 |
| ·质粒DNA在释放介质中的稳定性研究 | 第85页 |
| ·纳米粒体外释放试验 | 第85-86页 |
| 8 释放DNA样本的结构和功能完整性 | 第86页 |
| ·结构完整性考察 | 第86页 |
| ·生物活性考察 | 第86页 |
| 9 DNA-PLA-PEG-NPs的细胞毒性试验 | 第86页 |
| 10 统计学分析 | 第86-87页 |
| 11 DNA-PLA-PEG-NPs体外转染试验 | 第87页 |
| 三、实验结果 | 第87-100页 |
| 1 单因素考察结果 | 第87-90页 |
| ·PLA-PEG浓度对纳米粒粒径的影响 | 第87-88页 |
| ·CTAB和吐温80浓度对纳米粒粒径的影响 | 第88-89页 |
| ·丙酮体积对纳米粒粒径的影响 | 第89页 |
| ·磁力搅拌速度对纳米粒粒径的影响 | 第89-90页 |
| ·滴加速度对纳米粒粒径的影响 | 第90页 |
| 2 正交设计结果 | 第90-91页 |
| 3 处方重现性考察结果 | 第91-92页 |
| 4 PLA-PEG-NPs与DNA的结合率评价结果 | 第92-93页 |
| 5 纳米粒的理化性质评价 | 第93-94页 |
| 6 纳米粒抗核酸酶解能力考察 | 第94-95页 |
| 7 纳米粒的血浆稳定性考察 | 第95-96页 |
| 8 纳米粒的体外释放试验 | 第96-97页 |
| ·质粒DNA在释放介质中的稳定性研究 | 第96-97页 |
| ·纳米粒体外释放结果 | 第97页 |
| 9 释放DNA样本的完整性考察 | 第97-98页 |
| ·结构完整性考察 | 第97-98页 |
| ·功能完整性考察 | 第98页 |
| 10 纳米粒的细胞毒性评价结果 | 第98-99页 |
| 11 纳米粒的体外转染试验结果 | 第99-100页 |
| 四、讨论 | 第100-103页 |
| 第五部分 阴离子生物粘附型载基因PLGA纳米粒的研究 | 第103-119页 |
| 一、实验材料 | 第104-105页 |
| 1 试剂与药品 | 第104页 |
| 2 主要仪器 | 第104-105页 |
| 二、实验方法 | 第105-108页 |
| 1 乳化剂溶液的制备 | 第105页 |
| 2 空白纳米粒的制备 | 第105页 |
| 3 纳米粒物理形态,平均粒径和zeta电位 | 第105-106页 |
| 4 载基因纳米粒的制备 | 第106页 |
| 5 DNA凝胶阻滞试验 | 第106页 |
| 6 生物粘附型纳米粒的缓冲能力评价 | 第106页 |
| 7 纳米粒的体外释放试验 | 第106页 |
| 8 纳米粒的抗DNase Ⅰ能力 | 第106-107页 |
| 9 释放DNA的结构完整性考察 | 第107页 |
| 10 细胞毒性考察 | 第107-108页 |
| 11 统计学分析 | 第108页 |
| 12 体外细胞转染试验 | 第108页 |
| 三、实验结果 | 第108-116页 |
| 1 PLGA纳米粒的理化性质 | 第108-110页 |
| 2 凝胶阻滞分析 | 第110页 |
| 3 生物粘附型纳米粒的DNA吸附率 | 第110-111页 |
| 4 生物粘附型纳米粒的缓冲能力评价 | 第111-112页 |
| 5 体外释放试验 | 第112页 |
| 6 抗核酸酶解能力 | 第112-114页 |
| 7 从纳米粒中释放的质粒DNA的结构完整性考察 | 第114-115页 |
| 8 细胞毒性评价 | 第115页 |
| 9 体外细胞转染试验 | 第115-116页 |
| 四、讨论 | 第116-119页 |
| 总结与展望 | 第119-124页 |
| 一、结论 | 第119-121页 |
| 二、创新与发现 | 第121-122页 |
| 三、展望 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-134页 |
| 致谢 | 第134-135页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第135-136页 |
| 文献综述 聚乳酸-聚乙醇酸纳米粒作为非病毒基因载体 | 第136-143页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第143页 |
